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用羧基荧光素二乙酸琥珀酰亚胺酯（carboxyfluorescein diacetate succinimidyl ester，CFSE）检测PBMC中淋巴细胞（如T细胞）的增殖，并不是一个傻瓜式的方法。CFSE对于细胞有毒性，如CFSE标记浓度未进行优化，则可阻碍细胞增殖而对实验结果产生错误的干扰。一篇由Quah等人发表在Nature Protocols上的文章详细讲述了CFSE标记条件及其优化（http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/17853860）
CFSE检测细胞增殖
CFSE是一种可透过细胞膜的荧光染料，激发和发射波长与FITC类似，因此可在FITC通道检测。CFSE的前体CFDA-SE是没有荧光的，但可直接透过细胞膜进入细胞，而一旦进入细胞，其乙酸基团被胞内酯酶移除后，即可产生具有荧光的CFSE，且不容易释放到细胞外。同时，CFSE的琥珀酰亚胺酯与伯胺基可共价结合，从而长时间存在于细胞内。随着细胞的分裂，CFSE逐渐分配到子代细胞中，逐代稀释，因此，可轻松使用流式细胞术检测到细胞分裂了几代。
按照Quah等人的protocol，CFSE在淋巴细胞增殖中的应用需注意以下4方面条件：
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总之，CFSE检测细胞增殖的步骤和方法有不少玄妙之处，各位站友在做实验过程中记得对以上提到的4个因素进行关注和优化，建议进一步阅读下列文献：
Monitoring lymphocyte proliferation in vitro and in vivo with the intracellular fluorescent dye carboxyfluorescein diacetate succinimidyl ester. Quah BJ, Warren HS, Parish CR. Nat Protoc. 2007;2(9):2049-56. Measuring lymphocyte proliferation, survival and differentiation using CFSE time-series data.Hawkins ED, Hommel M, Turner ML, Battye FL, Markham JF, Hodgkin PD. Nat Protoc. 2007;2(9):2057-67.
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发表于 2013-5-10 14:58:12
发表于 2013-5-10 21:26:43
