流式结果检测凋亡的可重复性

椴树

我想做出如下图所示的柱状图，那么我是不是除了保证我操作上的一致性外，我上流式的电压补偿划门等等都最好一致是么？大家流式结果的重复性怎么样呢？图片来自Emodin azide methyl anthraquinone derivative triggers mitochondrial-dependent cell apoptosis involving in caspase-8-mediated               Bid cleavage

niwanmao

同一种细胞，同一次检测，尽可能用同样的十字门分析，尤其是象这幅图中MDA-MB细胞分群不明显的情况。除非你处理的药物影响了其背景荧光水平，可能会稍微变动一下。
但不同次的检测，如果你的流式细胞仪参数发生了调整，可以变动十字门。
至于图中的柱状图，是至少3次独立测试的平均值±SD。

椴树

niwanmao 发表于 2013-5-14 19:27

                               
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同一种细胞，同一次检测，尽可能用同样的十字门分析，尤其是象这幅图中MDA-MB细胞分群不明显的情况。除非你 ...

好的谢谢老师 我这次做了一个肺腺癌上皮细胞的，好像细胞很强悍，看FSC和SSC都没有什么碎片，而且Q4象限的活细胞都在98%以上。老师 您再帮我看个图，就是Q1象限的散点好像落在2条平行线上（这组悬浮细胞收集的时候，就发现离心损失了不少，应该是碎了或者通透性变化吧）

niwanmao

椴树 发表于 2013-5-14 20:20

                               
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好的谢谢老师 我这次做了一个肺腺癌上皮细胞的，好像细胞很强悍，看FSC和SSC都没有什么碎片，而且Q4象限的 ...

不知道这个标本有没有单染的图和对应的fsc/ssc？如果能把原始数据传上来更好。

椴树

niwanmao 发表于 2013-5-14 21:39

                               
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不知道这个标本有没有单染的图和对应的fsc/ssc？如果能把原始数据传上来更好。 ...

好的，我把原始数据传上来，这个是上面给图的悬浮细胞的数据

niwanmao

椴树 发表于 2013-5-14 22:28

                               
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好的，我把原始数据传上来，这个是上面给图的悬浮细胞的数据

所有文件翻了下，确实DATA.013死细胞最多，这种PI高表达的就是死细胞造成的。设门我根据你control文件，稍微往左移了一点点。

data.013

data.013 AV-PI

椴树

niwanmao 发表于 2013-5-14 21:39

                               
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不知道这个标本有没有单染的图和对应的fsc/ssc？如果能把原始数据传上来更好。 ...

好的，谢谢老师，那我这次实验其他组的细胞都得用这个十字门了？这个十字门都是根据control设么？

椴树

niwanmao 发表于 2013-5-15 12:14

                               
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所有文件翻了下，确实DATA.013死细胞最多，这种PI高表达的就是死细胞造成的。设门我根据你control文件， ...

老师，你能不能讲下 FSC和SSC那张圈门怎么圈啊，我都是圈到细胞密集的那一堆，我发现十字门位置一样的话，前面那个门不一样，数据也会差很多，flowjo里怎么自动把设好的门应用到全部数据里去呢？

niwanmao

椴树 发表于 2013-5-15 14:49

                               
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好的，谢谢老师，那我这次实验其他组的细胞都得用这个十字门了？这个十字门都是根据control设么？ ...

如果你这些细胞种类都是一样的，处理方式也一样（即同一种药物），那么就用同一个十字门，都根据分群清楚的那个标本设置，可以是浓度最高的，也可以是control，只要AV+PI-、AV+PI+、AV-PI+等细胞分的清楚即可。

niwanmao

椴树 发表于 2013-5-15 15:20

                               
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老师，你能不能讲下 FSC和SSC那张圈门怎么圈啊，我都是圈到细胞密集的那一堆，我发现十字门位置一样的话 ...

应该就013和010这两个数据死细胞多一些，其它标本的FSC/SSC分的都还好吧，就圈那堆近圆形的最多的细胞群，我试了下，变化应该还好啊，比如010那个数据，只要圈中那堆圆的，移动一下大概在AV+PI-比例大概在8－12左右变化，应该还是可以接受的。