美天旎磁珠分选人外周血NaiveCD4T细胞

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我使用的美天妮磁珠分选人外周血NaiveCD4+T细胞试剂盒，分选后CD4+T细胞纯度能达90%，但CD4+CD45RA+细胞只有60%，纯度一直不理想，请大家指教。

mybiosciences

这是个阴选试剂盒，上样量可能太大了

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我们用了LS柱，细胞量也控制了。但还是只有60%。

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我们这边做阴选的效果都不怎么好，这个美天妮效果也不怎么好啊

niwanmao

63735523 发表于 2013-6-8 22:14

                               
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我们这边做阴选的效果都不怎么好，这个美天妮效果也不怎么好啊

@olivezhou0716  

olivezhou0716

63735523 发表于 2013-6-8 21:25

                               
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我们用了LS柱，细胞量也控制了。但还是只有60%。

细胞数量有多少？磁珠加了多少？细胞活率多少？buffer怎么配的？这些都是影响因素，另外，CD4表达比较强，CD45RA较弱，分选前的对照需要设好。可以数据操作步骤发到我的邮箱

vanessa

olivezhou0716 发表于 2013-6-14 00:56
细胞数量有多少？磁珠加了多少？细胞活率多少？buffer怎么配的？这些都是影响因素，另外，CD4表达比较强 ...

您好，请问可以请教一下嘛？我今天也用了美天旎家的Naive CD4+T kit做分选，上了流式，最后CD4+CD45RA+的只有百分之30左右。
分选的时候用LS柱，分选前细胞计数，感觉细胞比较多所以细胞计数不准确，估计有10^8-9的细胞左右。Buffer是美天旎买的即用型，因为感觉细胞比较多，孵抗体的时候调整了剂量，Protocol的1.5倍剂量。上完样品后再用了4ml buffer过柱。
然后上流式，细胞计数大约每管1*10^6（估计计数不准确，可能有10^8-9个），CD4抗体5ug/管，CD45RA抗体也是5ug/每管。
最后双阳细胞只有百分之30左右。

hjj

请问楼主，您弄明白原因没？我是分选的记忆T，用的也是他家的，有时纯度80%，有时也只有30%-60%，我也搞不懂。
谢谢！

hjj

niwanmao 发表于 2013-6-9 14:00
@olivezhou0716

倪老师您好，我用Miltenyi的磁珠分选的幼稚和记忆T，有时纯度很高，有时纯度很低。用的都是一样的操作步骤，最近分了2次，第一次用的血袋（溶血了的），幼稚T纯，记忆T不纯。第二次抽的新鲜血做的，记忆T也不纯，感觉有很多死细胞。实在想不通。流式图如下，故请较倪老师，谢谢您！

niwanmao

hjj 发表于 2020-6-28 17:01
倪老师您好，我用Miltenyi的磁珠分选的幼稚和记忆T，有时纯度很高，有时纯度很低。用的都是一样的操作步 ...

新鲜血的那两个图，坐标全是黑的，看不到。有点奇怪是补偿太过了？还是什么原因，细胞分群为什么是这样的？