求助：如何对混合NK/T细胞进行进一步分群

kobe327292007

如图：左上为NK细胞，右下为T细胞。
我想问一下，有没有办法，将T细胞在不进行磁珠分选的前提下，直接再次对混合NK/T细胞中的T细胞进行分析，比如看下各种T细胞亚群的比例等？

同时NK细胞能不能利用同样的方法进一步分析其膜表面受体表达？

niwanmao

你能否把FSC、SSC设门图放上来，我觉得你中间是不是把单核细胞也圈进去了？

kobe327292007

niwanmao 发表于 2013-6-10 08:16

                               
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你能否把FSC、SSC设门图放上来，我觉得你中间是不是把单核细胞也圈进去了？ ...

做流式的老师说所圈的细胞是淋巴细胞。

说一下我做的实验吧，是用淋巴细胞分离液分离的单个核细胞，所以肯定有单核细胞的污染，但是主要是淋巴细胞，然后将淋巴细胞与肿瘤细胞A共培养，看看淋巴细胞共培养之后的分群。

niwanmao

kobe327292007 发表于 2013-6-10 10:03

                               
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做流式的老师说所圈的细胞是淋巴细胞。

说一下我做的实验吧，是用淋巴细胞分离液分离的单个核细胞，所 ...

嗯，了解了，看样子单核细胞应该很少了，不过细胞状态似乎不太好。

NK细胞如果你把CD56和CD16分成不同的标记，可以细分，这几个标记够了，
至于T细胞亚群，可以根据你的流式细胞仪配置，加入其它荧光进行进一步分析Th和Tc亚群：
Th：http://www.flowcyto.cn/bbs/thread-2374-1-1.html
Tc： http://www.flowcyto.cn/bbs/thread-2402-1-1.html

kobe327292007

niwanmao 发表于 2013-6-10 11:02

                               
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嗯，了解了，看样子单核细胞应该很少了，不过细胞状态似乎不太好。

NK细胞如果你把CD56和CD16分成不同的 ...

老师，你提供的链接都是用多色流式啊，有没有简单点的？双标的能行么？多色流式我现在都还看不懂。

niwanmao

kobe327292007 发表于 2013-06-10 12:54:30

                               
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老师，你提供的链接都是用多色流式啊，有没有简单点的？双标的能行么？多色流式我现在都还看不懂。

双标没法区分那么细的。你们的仪器是几色的？多色分析很简单的，尤其现在的仪器和分析软件都很强大。

dragonhzqsmmu

niwanmao 发表于 2013-6-10 13:23

                               
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双标没法区分那么细的。你们的仪器是几色的？多色分析很简单的，尤其现在的仪器和分析软件都很强大。 ...

不行你可以试试先用CD3的磁珠纯化一下，然后用CD16和CD56的进行亚群分析？？

dragonhzqsmmu

如果你用的流式细胞仪可以检测一大堆颜色的话，可以试试beckman公司的这个超级复杂的protocol

本来想上传附件的，结果一直提示服务器错误，给个链接看看

http://cytobase.montp.inserm.fr/ ... d%20NKT%20cells.pdf

dragonhzqsmmu

这个我自己做的一个标本，CD3-FITC\CD56-PE/CD16-APC

具体的分群方法，还想请高手指点一下

图1

图2

kobe327292007

niwanmao 发表于 2013-6-10 13:23

                               
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双标没法区分那么细的。你们的仪器是几色的？多色分析很简单的，尤其现在的仪器和分析软件都很强大。 ...

老师，我看了下，我们用的就是BD FACS Calibur。。。