从图片看。这细胞是阻滞吗？

赖浩强

各位老师好，这是经过药物处理后的细胞，请问这样一看细胞形貌，特别是中间浓度作用下细胞核貌似都变大了，这能否初步判断是周期阻滞不（虽然有点勉强）？如果从图片判断阻滞，除了细胞数目减少外，是否细胞核变大也是以判断标准？

niwanmao

细胞变大只能推测是否可能发生凋亡或坏死吧。周期阻滞我觉得还是得做一下流式或组化之类的！

赖浩强

niwanmao 发表于 2013-6-17 10:51

                               
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细胞变大只能推测是否可能发生凋亡或坏死吧。周期阻滞我觉得还是得做一下流式或组化之类的！ ...

老师看我的这是凋亡多一点还是坏死像一点？我收蛋白的时候药物处理后细胞形貌也跟这个中间浓度差不多，就是飘起来的细胞比较少。

niwanmao

赖浩强 发表于 2013-6-17 11:14

                               
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老师看我的这是凋亡多一点还是坏死像一点？我收蛋白的时候药物处理后细胞形貌也跟这个中间浓度差不多，就 ...

光看这种光镜下的形态我真看不出来。

samly0

细胞背景怎么那么多黑色的小点点啊，原来我还以为是你的药物颗粒，后来一看对照组也有，这种细胞株本来就是这样的么？

samly0

1、从control组看，一般我们看到这种颗粒的黑点，加上细胞中有些形态有细长拖尾，尾部也有颗粒的，都会高度怀疑支原体污染，我看你的细胞，大部分是平铺的多边形带短小圆钝角，应该是这种细胞株本来的形态吧，出现少部分是带细长触角的，有可能是污染支原体的，除非这种细胞株本身就会分泌出这种黑色颗粒的，建议排除下支原体污染。
2、药物阻滞从光镜的形态学很难判断的，只能简单判断看出来细胞是否被诱导凋亡或者坏死，但是药物诱导的细胞凋亡很多机制的，周期阻滞是其中之一，所以看是不是周期阻滞，光镜看不出来的，一定要做流式测周期，或者其他方法，如果镜下有明显凋亡现象，周期阻滞做不出了，说明药物可能不影响周期蛋白，转而考虑其他跟凋亡相关的机制了。
3、我仔细对比了下对照组跟加药组，还不能判断细胞变大，因为你的对照组中也有跟高浓度组一样大的圆形细胞，只是细胞变少了，形态分辨明显点，建议做DAPI染色，才有确凿的证据判断的。

赖浩强

niwanmao 发表于 2013-6-17 11:28

                               
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光看这种光镜下的形态我真看不出来。

谢谢老师！

赖浩强

samly0 发表于 2013-6-19 16:23

                               
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1、从control组看，一般我们看到这种颗粒的黑点，加上细胞中有些形态有细长拖尾，尾部也有颗粒的，都会高度 ...

谢谢老师，这个小黑点我也不知道是什么，因为：
（1）细胞培养中都加双抗，难道真是老师说的支原体污染吗？支原体污染怎么解决？
（2）也不知道是不是细胞本身就分泌这种东西，因为实验室师兄师姐养的时候也有这些小黑点，这细胞叫HUVEC.
(3）加药后细胞形貌改变中，在收蛋白加药处理，流式加药处理后，细胞形貌都是出现如图中高浓度现象，而对照组也有一点，但是基本都是细长细长，如图中Control所示。

didi_zhou

赖浩强 发表于 2013-6-20 11:01

                               
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谢谢老师，这个小黑点我也不知道是什么，因为：
（1）细胞培养中都加双抗，难道真是老师说的支原体污染吗 ...

支原体污染很严重，到处都是黑点，已经不能直接反应细胞的原本特性，建议先杀支原体，否则实验结果真实性难以判断，实验结果漂移也会很厉害。

Flower

支原体污染光镜下是看不见的吧？LZ培养的这是什么细胞？细胞刚贴壁不久时的照片有么？