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看很多用户都有考虑或者讨论过使用流式来做细胞信号通路的,其实在我做研究生的时候也深有体会,如果流式吧WB完全取代就好了。所有实验都可以在3个小时内完成,就不用搞一整天或两天那么麻烦了。特别是磷酸化,很难重复,做完又要去做灰度扫描什么的。
当时由于直标抗体的限制,以及试剂的影响所以很难做到。不过经过这几年的发展,各个公司都推出了相应的商品化试剂及各种指标抗体,这个问题也算解决了。
下面介绍的这个实验是用LPS刺激人血后观察其SAP-JNK、pERK、p-p38在1、2、4、6、10、15、20、30、40、50及60分钟后的变化情况,使用Kaluza软件的雷达图同分析很好玩大家一起讨论讨论。
仪器:Gallios
染料:CD14-PC7、SAP-JNK-PE、pERK-Alexa 647、p-p38-Alexa 488
破膜固定剂:PerFix-EXPOSE(可实现胞外、胞内、磷酸化一起染)
分析软件:Kaluza 1.2
图中蓝色散点表示Control,红色表示实验组。雷达图分个轴,靠近原点表示阴性,远离表示阳性;两轴之间远离原点表示共阳;靠近一个轴远离原点表示单阳。
下面是1 min的结果(更多结果内容请看PDF附件):
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