请教全血处理流式抗体标记问题

dragonhzqsmmu

请教一下各位老师，我看很多protocol包括一些公司的流式细胞抗体说明书都说直接在100ul的全血中加入相应抗体进行标记，这个是为了操作方便减少细胞损伤？还是同时涉及全血中的一些蛋白可以起到封闭非特异性位点的作用？

因为我们留取相关的标本希望能充分利用，一般是全血来了后直接离心分离血清和下面的血细胞，把下面的血细胞加一倍体积的PBS稀释后标记抗体再裂红处理，这样是否会影响最后的流式细胞结果？另外这样裂红操作是否会有影响？因为感觉裂红效果不是非常理想

niwanmao

全血直接加并不是其中的蛋白起到封闭作用，而是为了避免一些稀有细胞的丢失。另一个方便之处就是处理速度快。

你们分离血清后再用下面的血细胞进行处理，此时的红细胞密度会非常高，所以用普通量的红细胞裂解液肯定很难裂干净，此时，建议你分两次裂红，2ml 5分钟->离心->再用2ml 5分钟，这样效果会好一些。如果还不行，就将后一个5分钟延长至10 分钟。
红细胞裂解不干净不会影响结果，但对于calibur这类通量低的机器，会影响最终获取的有效信号数量。所以尽量将红细胞裂解干净 。

dragonhzqsmmu

niwanmao 发表于 2013-7-1 11:36

                               
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全血直接加并不是其中的蛋白起到封闭作用，而是为了避免一些稀有细胞的丢失。另一个方便之处就是处理速度快 ...

学习了，多谢老师指点，我们之前确实是裂红一次效果不是很彻底，您看对于100ul的全血标本用1×的裂红液2ml，我们一般是使用50ul体积，是不是裂红液减少到1ml？

dragonhzqsmmu

niwanmao 发表于 2013-7-1 11:36

                               
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全血直接加并不是其中的蛋白起到封闭作用，而是为了避免一些稀有细胞的丢失。另一个方便之处就是处理速度快 ...

人的标本因为量大用全血不心疼，但是老鼠特别是小鼠的标本真心不敢用全血做，因为还有好多因子需要血清去检测，但采血量又少，只能离心再用PBS稀释做

niwanmao

dragonhzqsmmu 发表于 2013-7-2 12:53

                               
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学习了，多谢老师指点，我们之前确实是裂红一次效果不是很彻底，您看对于100ul的全血标本用1×的裂红液2m ...

如果象你前面说的，这个50ul标本是离心去过血清的，并且未经PBS没有稀释，那么红细胞裂解液还是不能减量，因为红细胞数量多。

niwanmao

dragonhzqsmmu 发表于 2013-7-2 13:02

                               
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人的标本因为量大用全血不心疼，但是老鼠特别是小鼠的标本真心不敢用全血做，因为还有好多因子需要血清去 ...

哦。老鼠的血是少的。那只能尽量节省。

dragonhzqsmmu

niwanmao 发表于 2013-7-2 14:20

                               
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如果象你前面说的，这个50ul标本是离心去过血清的，并且未经PBS没有稀释，那么红细胞裂解液还是不能减量 ...

多谢老师解答，这个50ul是全血不是离心去过血清的

niwanmao

dragonhzqsmmu 发表于 2013-7-2 19:30

                               
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多谢老师解答，这个50ul是全血不是离心去过血清的

噢，按照我们的习惯，还是加2ml更稳妥