CyTOF Mass Cytometer日常校准和运行指南

niwanmao

第一次在视频中看到CyTOF Mass Cytometer真机外形，这是Jove上的一篇文章，作者现身演示了CyTOF Mass Cytometer的日常校准和开机、运行、关机等步骤，供大家参考。
从下面两幅截图看，有两点感触，希望懂的人一起讨论一下：

• 仪器真大，旁边还得配置这些大的瓶瓶罐罐，上样一定得用针筒吗？
• 从软件界面看，好像元素周期表，而不是象我们普通流式细胞仪那样的荧光，难怪不需要调节补偿。
  

机器外形

元素选择界面

如果无法播放，请点击此处在新窗口打开

hbezyr

我们以前上课时讨论过这个东西，原理如下：
1、抗体首先用比较重的稀土元素来标记；
2、抗体标记细胞，包括表面和胞内抗原，和正常流式操作一样
（这时，因为不同细胞抗原的表达量不一样，结合到的抗体量不一致，因而各个细胞内有不同量的稀土元素）；
3、细胞通过气流通道，变成了单个细胞
4、细胞被雾化 （nebulization），此时细胞中没有抗体抗原蛋白质了，只有各种元素的原子；
5.ICP原理：

、
6. 经过四级杆（quadrupole）后，只有重的元素可以经过，那些overly abundant ions removed。



这是稀土元素已知的谱线。

可以把下图视作是一个结果，可以看到Ge和La有不同的峰。如果提前用标准浓度的来做一个校准，就可以定量检测了。



这个原理的实质是把不同抗原量的表达，转换成了稀土元素的不同丰度。其实在上机后，细胞就死了，不能分选。而且速度也是比较慢的。

hbezyr

仪器真大，旁边还得配置这些大的瓶瓶罐罐，上样一定得用针筒吗？
应该是提供ICP能量的。上样什么的，我不清楚。

从软件界面看，好像元素周期表，而不是象我们普通流式细胞仪那样的荧光，难怪不需要调节补偿。
这是这个方法的最好的地方。但是也只能分析，无法分选。

dragonhzqsmmu

这些个瓶瓶罐罐的应该是供应质谱的气流，需要超高纯度的氩气，整个系统跑起来的话空气污染还是比较严重的，一般要求有负压废气处理装置的，最左边的那个是大的储备罐，中间两个是连接机器的高压气罐？
用针筒上样是不是因为还是手动进样的，高级点的估计能配置自动进样装置的

99.999% Ultra-high purity  Argon gas

http://www.jove.com/video/4398/m ... ing-cell-samples-on

dragonhzqsmmu

这个机器的关键我觉得是在于它的高通量，老外用它来研究白血病细胞之间的相关关系

http://www.youtube.com/watch?v=hAZBg0naPBg
这个是youtube上面一个斯坦福大学教授的实验室用这个机器做白血病的相关介绍视频，哪位大神把它拖下来？

额外再分享一篇cell的有关这个机器的文章，估计这两年这个机器要红火了

niwanmao

dragonhzqsmmu 发表于 2013-7-5 10:59

                               
登录/注册后可看大图

这个机器的关键我觉得是在于它的高通量，老外用它来研究白血病细胞之间的相关关系

http://www.youtube.com ...

应该是通量低吧？这机器肯定没有普通流式通量高

dragonhzqsmmu

niwanmao 发表于 2013-7-5 11:15

                               
登录/注册后可看大图

应该是通量低吧？这机器肯定没有普通流式通量高

可能我说的不准确，它这个机器的通量主要在于单细胞可同时检测几十个信号通路的变化情况，但普通流式细胞仪即使是多色的流式细胞仪由于荧光的限制和补偿的调节和优化，检测通量要少很多（当然对于俺们屌丝来说已经是天量了），但整体能同时分析的细胞数目由于受到质谱需要气化的限制不是很高
它的特色在于：
Single-Cell Mass Cytometry

dragonhzqsmmu

这个技术是加拿大多伦多大学一个教授发明并最终商品化的

网页的题目很是震撼，洞察细胞的灵魂-----“Seeing Into the “Soul” of Cells”

http://www.magazine.utoronto.ca/ ... tof-mass-cytometry/

niwanmao

dragonhzqsmmu 发表于 2013-7-5 10:59

                               
登录/注册后可看大图

这个机器的关键我觉得是在于它的高通量，老外用它来研究白血病细胞之间的相关关系

http://www.youtube.com ...

视频下载下来了，一共4分30秒，但看了之后没什么感觉，没有详细的讲解如何检测，只是一些理论上的探讨，想想还是不放上来了。

至少是否会火，我觉得有点困难，毕竟这种仪器不单单通量不高（虽然参数和补偿方面存在较大优势），而且这些元素我担心有放射性。

shoenchen

niwanmao 发表于 2013-7-5 21:10
视频下载下来了，一共4分30秒，但看了之后没什么感觉，没有详细的讲解如何检测，只是一些理论上的探讨， ...

用的都是没有放射性的稀土元素来标记的，这个倒不用担心。

哪些罐子，大的是液氩，可以放在其他房间。机器确实挺大的。