请大家看看这个慢粒急变

zdzcqums

慢粒急变期病人，医生说骨髓涂片有60-80%的异常细胞，估计在CD45-SSC中和粒细胞混在一起了，只能用反向设门看看，总的来看，所有白细胞中，CD13、CD64、CD15、CD11b阳性的细胞集中于粒细胞的左上侧，而CD34、HLA-DR、CD19、CD10、CD56、CD20、CD22、CD23、CD25阳性的细胞则集中于CD45-SSC中淋巴细胞上边、粒细胞右侧，但是MPO阳性的细胞也主要是在这个位置，所以很难判断是否急淋变。各位老师请指教指教，先谢了。

niwanmao

zdzcqums 发表于 2013-8-11 12:51

                               
登录/注册后可看大图

原始数据来了,请倪老师抽空看看,谢谢了!

你们用三色方案啊。由于我不习惯用SSC（LIN）看图，故改成用Logicle模式显示，建议你在平时还是用CD45-SSC（log）获取数据，这样看图分群会更清楚一点。当然，ssc(lin)也不是说不行，个人习惯而已。
我来谈谈我自己对于这些数据的看法：
1、非特异性染色太强，尤其是CD45高的单核细胞位置，造成很多假阳性。如下图：

一开始我以为是真阳性，后来不断地往下翻，发现不对，几乎所有PE标记都阳性，这种细胞应该是不存在的。
为了排除此类非特异性染色导致的假阳性，可以改成在CD45/FL2散点图上设如下的门，读取其表达率：


2、既然确定了C为正常单核细胞，那么接下来就是确定A中间的部分细胞CD19、CD10双阳性问题。从下图看，CD10阳性没有问题，但对于CD19阳性，我依然是抱怀疑态度。CD19和CD22这两个标记我整体看下来，感觉更多的这两个抗体有点问题，可能是由于粒细胞SSC高导致的抗体非特异性增高，而不是真正的阳性。而且我似乎现在都还没看到过SSC这么高的急淋细胞。所以我觉得A应该都是粒细胞。但是其中这群CD10阳性的粒细胞可能是分化有问题的，因为它们的CD15和CD11b都是阴性的。

为什么说CD22有点问题，因为淋巴细胞群D的CD7表达率约50％，说明T和NK约占50％，剩下应该基本上为B细胞，这类细胞应该是CD22、CD20双阳性的，然而，从下图看，这类细胞只看到少量细胞CD20单阳性，而CD22却缺失，这是不应该的。

总之，感觉你这些数据中的各个标记，很多标记不是荧光表达低就是表达缺失，非常奇怪，不知道你这个方案做了多久？正常人的标本做了多少？

zdzcqums

Tangzhongliang 8-10.pdf (813.56 KB, 下载次数: 7)

2013-8-11 09:40 上传

点击文件名下载附件

niwanmao

zdzcqums 发表于 2013-8-11 09:40

                               
登录/注册后可看大图

能不能把原始数据传上来，ssc用lin的好像看不出感觉

zdzcqums

谢谢倪老师，原始数据只能下午去单位拷了传上来。

zdzcqums

原始数据来了,请倪老师抽空看看,谢谢了!

zdzcqums

谢谢倪老师的详细解答。
我用Cellquest获取的数据，SSC一直都用的Lin，没有尝试过用LOG，所以还无法体会两种模式的差别，下次一定试试看。CD19假阳性的问题原来也遇到过，主要是因为补偿没调好导致的，这次应该也是这个原因。
这个方案做了两年多，我个人觉得还是应该比较可靠的，只是最近仪器的状态不太稳定，每次开机都需要调试，我打算再做一次看看。
再次感谢！

niwanmao

zdzcqums 发表于 2013-8-12 13:25

                               
登录/注册后可看大图

谢谢倪老师的详细解答。
我用Cellquest获取的数据，SSC一直都用的Lin，没有尝试过用LOG，所以还无法体会两 ...

可以用三色微球以及正常人标本做一下质控看看。质控还是很重要的。