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标题:如何检测全血中的lambda和kappa轻链 在白血病和淋巴瘤免疫分型中,我们经常会碰到检测lambda和kappa轻链的问题,跟IgM检测一样,这类免疫球蛋白的检测会受到血浆中免疫球蛋白的影响,因此在检测前需要尽可能减少血浆中免疫球蛋白的干扰。
下面推荐一个检测步骤:
- 收集外周血标本,抗凝剂可选择EDTA、肝素或枸橼酸钠
- 取2–3 ml 全血至25 ml的普通容器。然后加入20–25 ml PBS/BSA (含磷酸盐缓冲液 pH 7.4 和1\% BSA,预热至37度),充分混匀。
- 400 g 离心 5 分钟。小心的移除上清,注意不要扰动细胞团块。用残余的液体重悬细胞团块。
- 重复步骤2、3两次。
- 取100 μl洗涤过的全血至上样管,加入适量抗体(参照说明书),充分混匀,室温孵育30分钟。
- 加入适量的红细胞裂解液,室温裂解10分钟。400 g 离心 5 分钟,去上清。
- 用2 ml PBS/BSA洗涤细胞,400 g 离心5分钟,去上清。
- 用0.2 ml PBS/BSA 重悬细胞,如有需要,加入0.2 ml 0.5\% 多聚甲醛。
- 上机,获取数据。
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