跪求指点，分析小鼠HSC细胞

lilith

我们用的是BD的9种lineage marker(lin)和anti-Sca-1-PE，anti-c-Kit-APC三种表面抗原的抗体来分析小鼠骨髓中的造血干细胞，即lin阴性，Sca-1阳性，c-kit阳性的细胞群。
别人做的图是这样的（我们同样用的是野生型的小鼠）：

我们自己做的收集不到那么多的lin-细胞群（2.07%，正常应该在8%左右）：

而且，lin-的细胞中也没有明显的细胞分群：

请教大神，是哪里出问题了？跪求！！！

niwanmao

能不能把不设门的PE/APC图也放出来看看？

小玩紫

niwanmao 发表于 2013-9-24 14:05

                               
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能不能把不设门的PE/APC图也放出来看看？

您好这个是未设门的，谢谢~

niwanmao

小玩紫 发表于 2013-9-24 14:59

                               
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您好这个是未设门的，谢谢~

获取了20万个细胞，数量应该够，但是细胞分群似乎不清，建议首先看看细胞状态是否好（可加用LIVE/DEAD 来鉴别），其次排除抗体染色浓度等原因。

小玩紫

niwanmao 发表于 2013-9-24 15:25

                               
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获取了20万个细胞，数量应该够，但是细胞分群似乎不清，建议首先看看细胞状态是否好（可加用LIVE/DEAD 来 ...

您好~我的细胞状态是好的，可否请教下抗体染色浓度您是怎么用的？谢谢~~

niwanmao

小玩紫 发表于 2013-9-25 13:14

                               
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您好~我的细胞状态是好的，可否请教下抗体染色浓度您是怎么用的？谢谢~~ ...

举个例子吧，假如你的抗体推荐量是2.5ul，那么你做一个浓度梯度，例如5管50ul标本，分别加入1.5ul、2ul、2.5ul、3ul、3.5ul抗体，然后看细胞群分离情况和信噪比。

lilith

niwanmao 发表于 2013-9-24 15:25

                               
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获取了20万个细胞，数量应该够，但是细胞分群似乎不清，建议首先看看细胞状态是否好（可加用LIVE/DEAD 来 ...

你好，在做小鼠骨髓细胞染色的时候，我们查的步骤没有固定这一步，请问需要固定么？如不需要，是为什么呢？谢谢

niwanmao

lilith 发表于 2013-11-21 13:47

                               
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你好，在做小鼠骨髓细胞染色的时候，我们查的步骤没有固定这一步，请问需要固定么？如不需要，是为什么呢 ...

表面染色一般如果做完就直接上机，不需要固定。如果要过几个小时再上机，那么建议还是用多聚甲醛固定一下。

wmj123456

我也做了小鼠骨髓的HSC，圈出的Lineage-的比例有百分之30左右，异常吗？我看文献里的，没有这么高

niwanmao

wmj123456 发表于 2023-12-4 23:48
我也做了小鼠骨髓的HSC，圈出的Lineage-的比例有百分之30左右，异常吗？我看文献里的，没有这么高 ...

OMIP-059示例图显示的是20％多，还行吧。