流式细胞术双色散点图定量分析细胞周期所有时相

niwanmao · 发表于 2013-9-27 12:33:33

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一个好的细胞周期分析技术应该是可以同时检测凋亡、G0、G1、S、G2和M期，以及各种细胞表面标记。因此本文作者Christine Vignon等人研发出一种简易的流式细胞术方法，可利用双色散点图区分出各个时相，并进行定量。而方法中只需用到7-AAD和anti-Ki67、anti-phospho(Ser10)-histone H3，后两者均标记Alexa Fluor 488。分析方式如下图，在这个图中，每个时相均有其对应的位置，根据同型对照设置好位置，即可方便的定量分析各时相比例：

流式细胞术双色散点图定量分析细胞周期所有时相

该方法在临床应用中尤其有用，可分析白血病患者骨髓初发是或经细胞周期调节药物治疗后，白血病细胞的各个细胞周期。
详细方法参见文章正文部分，有意思的是，文中1ml骨髓用20ml氯化铵裂解液裂解10分钟居然是在37度的环境下进行，这个温度我从来没试过，因为氯化铵需要冷藏，温度高容易导致降解，不知道大家有没有试过这个温度？

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dragonhzqsmmu · 发表于 2013-9-28 21:27:57

氯化铵保存是在4度，但裂红操作我们都是在室温下进行的，当然因为空调的原因达不到37度，但也差不了太多了，我记得不少老外的protocol里面提及裂红也是在室温下进行的

niwanmao · 发表于 2013-9-28 21:43:25

dragonhzqsmmu 发表于 2013-9-28 21:27

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氯化铵保存是在4度，但裂红操作我们都是在室温下进行的，当然因为空调的原因达不到37度，但也差不了太多了 ...

裂解肯定都是在室温下进行的，但是37度确实还是第一次看到。

dragonhzqsmmu · 发表于 2013-9-28 22:19:18

这个protocol看了，有点和我们普通的方法有点不同，是先染色胞内再染色表面分子

niwanmao · 发表于 2013-9-29 08:29:17

dragonhzqsmmu 发表于 2013-9-28 22:19

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这个protocol看了，有点和我们普通的方法有点不同，是先染色胞内再染色表面分子 ...

是的，不过这两个分子（CD45、CD3）刚好丰度高，可能固定对它们影响不大。

cneagle · 发表于 2017-4-8 11:37:49

学习了，原来一直用PI染色，看了还有更好的方法啊

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流式细胞术双色散点图定量分析细胞周期所有时相

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