求大鼠脾组织的Th1/Th2/Th17/Treg流式的详细操作啊

z268435 · 发表于 2013-10-2 21:11:38

本帖最后由 z268435 于 2013-10-2 21:16 编辑

我最近要做流式检测大鼠脾脏的Th1/Th2/Th17/Treg，但我从杀老鼠取脾脏到上机检测都没接触过，特别是流式操作完全不懂，想请教各位大神可以帮忙给些操作的资料，还有指导一下具体步骤，最好是能有视频步骤，因为本人英语太差，视频最好是有字幕的，还有想问一下Th1/Th2/Th17/Treg好不好测的？

niwanmao · 发表于 2013-10-2 21:30:39

你这个帖子看似字少，要回答的内容其实很多，根本无法讲完。
这样吧，脾组织的分离和单细胞悬液制备请参见：流式分选小鼠脾脏B、T细胞群操作演示
单细胞悬液制备好之后，调整细胞密度至1×10E6/ml，Th1、Th2、Th17、Treg的染色就参见说明书好了。
至于说难不难做，按照标准做，不难，但如果其中细节上出问题，那也难。但是我建议你还是试了再说，无论什么实验，都不会是一步到位就能成功的，不摸索如何能成功。

z268435 · 发表于 2013-10-2 21:33:26

倪老师，我现在可能要两个月出结果，但是前期的造模就要一个月，所以现在很担心完成不了

z268435 · 发表于 2013-10-2 21:34:55

接到这个实验后头很大，无从下手，完全是个陌生的东西，不知道该从哪里开始

niwanmao · 发表于 2013-10-2 22:03:32

z268435 发表于 2013-10-2 21:33

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倪老师，我现在可能要两个月出结果，但是前期的造模就要一个月，所以现在很担心完成不了 ...

做实验只能靠自己，别人只能给你一些原则性的东西，即使给你详细步骤也是一样。时间紧可以跟上面的人商量，或者自己抓紧。先看看上面的资料，并在论坛里面搜索Th1、Th2、Th17、Treg等帖子，边看边做再说。

z268435 · 发表于 2013-10-3 10:59:47

谢谢倪老师，还有一个问题，大鼠脾脏取材后每个样本是不是只能够做一次实验的？有什么办法可以多次测量的？

niwanmao · 发表于 2013-10-3 11:44:33

z268435 发表于 2013-10-03 10:59:47

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谢谢倪老师，还有一个问题，大鼠脾脏取材后每个样本是不是只能够做一次实验的？有什么办法可以多次测量的？

PBMC冻存液合适是可以冻存起来下次做，但是组织细胞可能够呛，不过你可以验证一下，或许可以

z268435 · 发表于 2013-10-3 15:57:13

本帖最后由 z268435 于 2013-10-3 15:58 编辑

我要做的内容是脾组织检测：分离脾脏中单个核细胞，固定，染FITC-CD4，然后破膜，分别加Th1、Th2、Th17和Treg细胞的特异性抗体IL-4、IFN-γ、IL-17A和Foxp3。孵育后重悬、上机检测。这些操作需要注意什么吗？另外这个测定是不是和细胞定量不一样的

niwanmao · 发表于 2013-10-3 20:03:21

z268435 发表于 2013-10-3 15:57

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我要做的内容是脾组织检测：分离脾脏中单个核细胞，固定，染FITC-CD4，然后破膜，分别加Th1、Th2、Th17和Tr ...

多色流流式优化方案专辑里面有很多方案都是对冻存复苏标本进行优化的，应该对你有帮助：http://www.flowcyto.cn/bbs/forum.php?mod=collection&action=view&ctid=6

baolei0606 · 发表于 2014-4-14 21:57:30

niwanmao 发表于 2013-10-3 20:03
多色流流式优化方案专辑里面有很多方案都是对冻存复苏标本进行优化的，应该对你有帮助：http://www.flowcy ...

倪老师，做大鼠TH1/TH2分型，样本是用全血还是用PBMC好？

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