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流式细胞术检测嗜碱粒细胞数量、组胺含量及其释放

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发表于 2013-11-4 19:49:21 | 显示全部楼层 |阅读模式

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尽管毒液免疫治疗(venom immunotherapy)效果很好,但嗜碱和肥大细胞在其中的作用仍未完全明确。为此,S. Nullens等人研究了在毒液免疫治疗过程中嗜碱粒细胞的作用。
本文的方法用于检测毒液免疫疗法时嗜碱粒细胞组胺含量和释放,以评估其治疗效果。主要是介绍了用荧光标记的双胺氧化酶检测嗜碱粒细胞内组胺颗粒及其释放,在其中,用了CD63(可在CD分子数据库查询)和CD203c来圈嗜碱粒细胞。文章虽然仅仅是为了评估免疫疗法的效果,但其实在其它检测组胺的实验中也都可以应用。

阳性对照:200uL全血,与200uL anti-IgE (10 lg/mL; clone G7-18, BD Biosciences),37℃作用20分钟。
阴性对照:200ul全血,与200uL activation buffer [Hank’s balanced salt solution (Invitrogen, Paisley, UK)] with 20uM HEPES and 7.5% NaHCO3, pH 7.4, without IL-3)。条件同上。
上述标本在活化结束时,加入1ml冰冷PBS(含10mmol/L EDTA),并置于冰上,结束活化。

检测指标:IgE、CD63、CD203c,胞内组胺用二胺氧化酶抗体(DAO)检测。

结果:毒液免疫治疗开始时,患者嗜碱粒细胞较正常人明显增高,胞内组胺含量亦明显高于正常人;初始治疗完毕时,可见到嗜碱粒细胞数量减少,最后维持治疗时,嗜碱粒细胞恢复到治疗前水平,组胺含量也回到正常水平。

DAO结果分析示例

DAO结果分析示例


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发表于 2013-11-7 11:53:45 | 显示全部楼层
这个要好好研究一下,学习了
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