BD Aria III 96孔单一分选 进样速度、密度选择问题

月下听蝉

想问下@gcz5340 前辈
做BD Aria III的分选时，当我的细胞数比较多的时候（10^5），目标细胞占有的比例也比较大（约30%），一次分选又必须尽可能多地将目标细胞都拿下，而且是96-well single cell（不能预先富集，只能一开始即单一铺板）。当上样速度过快，或者我的样品细胞密度过大时，肯定是有很多目标细胞没有被机器分到96孔板的。但是当我把上样速度减慢或者样品稀释，损失是少一些，但整体时间严重拖长。
所以想问下，AriaIII 96孔单一分选，平板每移动一次最快需要多少时间？我上面描述的情况，如何选择最优的进样速度跟上样密度（或者说每秒的events多少比较合适）?

gcz5340

单细胞分选ACDU正经的我也只做过一次，当时还是每孔分100个细胞，当时细胞很多，所以速度也很快。
你这种实验很高端了，我也没什么经验，十分抱歉，也希望你摸索的经验跟我们分享下啊。其实马达动一格倒是很快，你也知道一起也就十几秒。
你这个实验用更大的喷嘴应该更好点吧，分选速度慢点，液滴大点对细胞也有缓冲作用。

月下听蝉

补充。移动一次指移动一格，如从A1到A2，算一次。

月下听蝉

gcz5340 发表于 2013-11-14 09:41

                               
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单细胞分选ACDU正经的我也只做过一次，当时还是每孔分100个细胞，当时细胞很多，所以速度也很快。
你这种实 ...

好，多谢！

PeteM

用大喷嘴，速度调低，细胞好像也没有那么脆弱，特别是hela细胞（我做过预实验）生命力顽强，其他细胞就不知道是否很脆弱