PMA刺激检测血液IFN-r的问题

liyi881228

一份用25ng/ml PMA加上10ug/ml BFA刺激外周血4h，
另一份用10ug/ml BFA刺激外周血4h
染色CD3-FITC,CD8-PE-596，INF-r-PE，得出来的比例好奇怪啊，感觉加了PMA和没加PMA几乎是一样的

niwanmao

可能跟刺激剂浓度有关吧，可以尝试一下多个浓度梯度看看。
PS： 干扰素应该是IFN，而不是INF。

liyi881228

niwanmao 发表于 2013-11-21 12:38

                               
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可能跟刺激剂浓度有关吧，可以尝试一下多个浓度梯度看看。
PS： 干扰素应该是IFN，而不是INF。 ...

我看文献中IFN-r的浓度都是25ng/ml，BFA浓度是10ug/ml，这个还需要做浓度梯度吗

niwanmao

liyi881228 发表于 2013-11-24 19:37

                               
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我看文献中IFN-r的浓度都是25ng/ml，BFA浓度是10ug/ml，这个还需要做浓度梯度吗 ...

做得出来，当然无需调整，但如果做不出来，是只能摸索条件。从图形上看细胞都没什么问题，接下来如果你能确认实验步骤和试剂没有问题，那么是只能从刺激条件上找问题，可能没刺激出来。

dragonhzqsmmu

PMA容易失效，需要一次分装后-20冻存，每次开一支就直接用完不再复冻

uniondavid

我用的PMA冻融过也没事，如果分装后一只只能用一次，那要分装多少了。