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[《流式细胞术方法学》] Chapter 1.7 从数据到信息

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发表于 2013-12-10 22:00:48 | 显示全部楼层 |阅读模式

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本节属于第1章 流式细胞术:简介
在将细胞的数据保存至数据文件之后,剩下的就是计算了。仪器商一般都会编写适合他们仪器的分析软件,有些软件商会编写第三方的分析软件。软件的价格各异,但他们的功能一样:显示数据文件中各个细胞的每一个参数 ,并以直方图或散点图、密度图、等高线图等形式展现出来,并且可进行设门(即只显示某一类细胞)。
直方图(见图10)是用于显示数据文件中所有细胞在一个参数上的分布。如果是一台五参数的流式细胞仪,就可以有5个参数可以描述每一个细胞(例如FSC、SSC、绿色荧光、橙色荧光、红色荧光的强度)。直方图实质上是一个柱状统计图,但由于细胞数量多,分辨率高,故这些柱形不明显,而是呈现一个单峰或双峰分布的曲线。利用标尺(marker),可以读出某个强度范围的细胞比例。

图10

图10



由于流式数据文件通常可提供很多个参数,故单独通过5个单参数的图形,往往无法很好的描述单细胞各个参数之间的关系,例如我们从直方图无法知道某个细胞的绿色荧光和红色荧光之间是什么关系,是单阳性还是双阳性表达。此时,就需要使用散点图、密度图、等高线图等双参数图,这些图形可为我们以不同的视觉方式呈现相同的数据(见图11),

图11

图11


从这些图上,我们可以分析出某个细胞究竟是单阳性表达某个标记还是双阳性表达,抑或是双阴性。
流式细胞术的另一个特点就可以设门分析,所谓设门,就是指可以圈中某类感兴趣的细胞,进一步进行分析。设门,可以使得我们能够从一群混合细胞群中选择某个亚群进行分析,图12就是一个分析外周血白细胞的例子,首先通过FSC/SSC散点图的分布,圈出粒细胞、单核细胞、淋巴细胞三个亚群,然后分析各类细胞的荧光表达情况。设门也可以很复杂,可以进行逻辑上的AND、OR、NOT等运算,从而区分出更精细、更复杂的亚群。

图12

图12


【流式中文网原创翻译,仅供学习研究用,如需转载,敬请注明出处】

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发表于 2018-11-5 17:10:05 | 显示全部楼层
请问现在哪些新式的流式细胞仪是采用数字化系统的?
 楼主| 发表于 2018-11-5 20:30:54 | 显示全部楼层
JasmineWu 发表于 2018-11-5 17:10
请问现在哪些新式的流式细胞仪是采用数字化系统的?

目前的流式细胞仪基本上都是数字型的。
发表于 2018-11-10 06:56:07 | 显示全部楼层
老师您好,我一直有一个疑问,很小白的问题,通过前向角和侧向角圈出来的特定细胞应该是大致范围吧,然后在利用荧光进一步圈门分析,我这么理解对吗?那应该如何从前向角和侧向角的信息里圈出我的目的细胞(淋巴细胞)呢?
 楼主| 发表于 2018-11-10 21:36:24 | 显示全部楼层
Anthony的杂货铺 发表于 2018-11-10 06:56
老师您好,我一直有一个疑问,很小白的问题,通过前向角和侧向角圈出来的特定细胞应该是大致范围吧,然后在 ...

如果FSC/SSC用在正常并且活性比较好的样本,一般问题不太大,可以清楚区分淋巴群体。
但如果样本状态一般,或者是组织样本,尽量用CD45/SSC圈,然后再加一个淋巴细胞某个亚群的特异性标记(例如CD3或CD19或CD56等)
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