ANNEXIN V-PI测凋亡前，贴壁细胞的消化方法？

niwanmao

标题：ANNEXIN V-PI测凋亡前，贴壁细胞的消化方法？

因为AnnexinV是Ca依赖的蛋白，所以不能加入EDTA， 防止EDTA螯合了Ca离子从而影响annexinV，进而影响结果。所以可以用不含EDTA的胰酶，放入温箱内进行消化，时间可以长一点，随时观察细胞情况，避免消化过度。

建议用细胞刮子把细胞刮下来，然后用枪吹匀，比消化还简单，而且也避免了胰酶带来的损伤，机械的损伤还是很小的因为细胞大多呈大片大片地被刮下来。

cneagle

贴壁细胞用Annexin V 做凋亡的文章很多啊，难道贴壁细胞不适合用Annexin做凋亡？

niwanmao

cneagle 发表于 2017-4-8 13:22
贴壁细胞用Annexin V 做凋亡的文章很多啊，难道贴壁细胞不适合用Annexin做凋亡？
...

如果你看图，会发现实际上很多图是有问题的，只不过评审没有在意而已。但最关键是，即使要做，也不能用含EDTA的酶。

cneagle

受教了，谢谢老师

名字真不好

倪老师，关于EDTA螯合Ca2+，我看到了2种说法，一种是说EDTA会螯合Binding Buffer里面的Ca2+，一种是说EDTA会螯合细胞膜表面的Ca2+，哪种说法正确？我更倾向于前者，但如果是这样的话，使用含EDTA的胰酶消化，随后PBS洗2遍，去除不掉EDTA？

以您的经验，胰酶消化到贴壁细胞全脱壁对凋亡结果影响小，还是说半脱壁后吹打影响小？

niwanmao

名字真不好 发表于 2017-12-21 15:47
倪老师，关于EDTA螯合Ca2+，我看到了2种说法，一种是说EDTA会螯合Binding Buffer里面的Ca2+，一种是说EDTA ...

上次在广州聚会时，我记得一个科研中心的FLOWER提到，应该是尽量消化时间短，然后用轻轻晃动的方式使其脱落，吹打和消化时间长均会影响结果。

名字真不好

niwanmao 发表于 2017-12-21 17:44
上次在广州聚会时，我记得一个科研中心的FLOWER提到，应该是尽量消化时间短，然后用轻轻晃动的方式使其脱 ...

多谢倪老师，但还是对PBS洗2遍能否去除EDTA带来的影响存在疑问。