间标同时检测膜表面和胞内抗原的对照设置

leosurely · 发表于 2013-12-17 11:27:07

刚接到一个棘手的活，要同时检测膜表面和胞内抗原，而且两个都用间接标记，荧光是FITC和PE
，这个对照要如何设置啊？我的想法是：
阴性对照：不加一抗，同时加两种二抗
补偿对照1：膜表面抗原的一抗+二抗
补偿对照2：胞内抗原的一抗+二抗
样本管：膜表面抗原的一抗、二抗+胞内抗原的一抗、二抗
问题是：阴性对照和样本管的两种二抗是分开染色还是固定破膜以后一起染呢？

niwanmao · 发表于 2013-12-17 14:31:18

我个人建议先染表面一抗+二抗，固定破膜后，再做胞内一抗+二抗。

zhunlei · 发表于 2013-12-18 10:37:51

CD4+ T细胞打孔后进行胞内染色，上机后就发现CD4+ 细胞不能独立分群了。

niwanmao · 发表于 2013-12-18 11:06:21

zhunlei 发表于 2013-12-18 10:37
CD4+ T细胞打孔后进行胞内染色，上机后就发现CD4+ 细胞不能独立分群了。

你这些细胞是经过PMA等刺激过吧？

leosurely · 发表于 2013-12-23 15:44:39

zhunlei 发表于 2013-12-18 10:37
CD4+ T细胞打孔后进行胞内染色，上机后就发现CD4+ 细胞不能独立分群了。

要看看你的CD4+T细胞是用什么荧光标记的，如果是用的pe-cy5这样的耦合燃料，有时会出现这样的情况。

xieqiankun · 发表于 2013-12-23 17:46:08

我在一篇文章见到关于IL-10胞内染色的方法，作者是首先进行表面染色，之后固定打孔，缓冲液洗涤，然后才行胞内染色，这点可以肯定。

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