请教关于记忆T细胞内检测转录因子的问题

86964109 · 发表于 2013-12-29 16:23:56

本帖最后由 86964109 于 2013-12-29 16:31 编辑

请教各位高手，想在小鼠记忆T细胞中检测GATA-3等转录因子的水平，这样设计是否合理：Mouse CD3e PE-CY5.5、MouseCD4 FITC、Mouse CD44 PE染色基础上（不区分中央T细胞和效应T细胞），打孔破膜，加Mouse GATA-3 APC染色，上机检测，对照管分别加Mouse CD44 PE和Mouse GATA-3 APC的同型抗体；
如果想检测IL4等细胞因子，是否也能这样操作？

谢谢！！

niwanmao · 发表于 2013-12-29 20:30:03

第一次做可以设三管：
1、Mouse CD3e PE-CY5.5、MouseCD4 FITC、Mouse CD44 PE
2、Mouse CD3e PE-CY5.5、MouseCD4 FITC、Mouse GATA-3 APC
3、Mouse CD3e PE-CY5.5、MouseCD4 FITC、Mouse GATA-3 APC、Mouse CD44 PE

前两管分别两个抗原的FMO对照，第3管是分析目标。后面几次如果条件没变动，而且仪器状态稳定，前两个FMO对照就不需要了。相关参考：FMO对照 vs. 同型对照

86964109 · 发表于 2013-12-30 08:43:34

niwanmao 发表于 2013-12-29 20:30
第一次做可以设三管：
1、Mouse CD3e PE-CY5.5、MouseCD4 FITC、Mouse CD44 PE
2、Mouse CD3e PE-CY5.5、Mo ...

谢谢老大，
1.也就是说可以不用设同型对照抗体，只用FMO设门就可以了，是么？

2.第一管扣除Mouse GATA-3 APC影响，第二管扣除Mouse CD44 PE影响，通过前两管设置条件检测第三管就可以直接分析结果了，这样理解可以吗？

3.另外，是不是这样进行样本处理呢？首先Mouse CD3e PE-CY5.5、MouseCD4 FITC、Mouse CD44 PE孵育标记表面分子，然后固定、细胞打孔，加入 GATA-3或者细胞因子抗体染色，最后上机检测

niwanmao · 发表于 2013-12-30 08:45:41

86964109 发表于 2013-12-30 08:43
谢谢老大，
1.也就是说可以不用设同型对照抗体，只用FMO设门就可以了，是么？

是的。

86964109 · 发表于 2013-12-30 08:53:31

niwanmao 发表于 2013-12-30 08:45
是的。

好的，明白了，3Q！！！

niwanmao · 发表于 2013-12-30 08:55:15

86964109 发表于 2013-12-30 08:53
好的，明白了，3Q！！！

对了，补充一下，第三管分析的设门是根据前两管FMO对照来设的。

86964109 · 发表于 2013-12-30 08:59:15

niwanmao 发表于 2013-12-30 08:55
对了，补充一下，第三管分析的设门是根据前两管FMO对照来设的。

嗯，晓得了

账号		自动登录	找回密码
密码			加入流式中文网

[淋巴细胞相关] 请教关于记忆T细胞内检测转录因子的问题