treg细胞的凋亡

lin850424 · 发表于 2014-1-5 19:57:42

请问是不是用foxp3标记的CD4+CD25+的Treg细胞就不能用annexin-V检测凋亡了啊？不都破膜了吗？

niwanmao · 发表于 2014-1-5 20:55:18

这方面做得有点细，确实没试过破核膜细胞的，不过从文献上看是可以的：http://bloodjournal.hematologylibrary.org/content/114/24/5003.full.pdf+html
可惜的是这篇文章的方法学里面只是指明了按照Blood网站的方法，在附件中，但似乎我就没找到这份材料。我估计应该是按照些CD4、CD25，然后再Annein V，最后固定、破膜、染foxP3。你再找找看。

dragonhzqsmmu · 发表于 2014-1-7 11:51:13

学习一下

lin850424 · 发表于 2014-1-7 15:32:35

niwanmao 发表于 2014-1-5 20:55
这方面做得有点细，确实没试过破核膜细胞的，不过从文献上看是可以的：http://bloodjournal.hematologylibr ...

找不到相关步骤啊，不过ebioscience有个protocol可能有点帮助，不知是否还有更好的见解?

niwanmao · 发表于 2014-1-7 18:10:03

lin850424 发表于 2014-1-7 15:32
找不到相关步骤啊，不过ebioscience有个protocol可能有点帮助，不知是否还有更好的见解? ...

就是这样子。没错。

lin850424 · 发表于 2014-1-7 22:39:00

niwanmao 发表于 2014-1-7 18:10
就是这样子。没错。

但是只能看早期凋亡，晚期和坏死的PI是没法染的啊

niwanmao · 发表于 2014-1-7 22:42:08

lin850424 发表于 2014-1-7 22:39
但是只能看早期凋亡，晚期和坏死的PI是没法染的啊

PI可以在上机前5分钟加入，看看细胞的死活。但是需要使其它抗体避开PE通道，并尽可能不用Percp通道。

lin850424 · 发表于 2014-1-7 22:46:48

niwanmao 发表于 2014-1-7 22:42
PI可以在上机前5分钟加入，看看细胞的死活。但是需要使其它抗体避开PE通道，并尽可能不用Percp通道。 ...

其实，我不太明白annexin-v是与膜外翻的PS结合，但是foxp3需要破膜，破膜后对这些结合的annexin-v没有影响吗？而且破膜后细胞还能活？PI染还有意义吗？文献没有这么做的啊

niwanmao · 发表于 2014-1-8 11:03:49

lin850424 发表于 2014-1-7 22:46
其实，我不太明白annexin-v是与膜外翻的PS结合，但是foxp3需要破膜，破膜后对这些结合的annexin-v没有影 ...

嗯，破膜确实会对pi染色有影响，昨晚回答时没深思过，还是你想的细

钢蛋儿 · 发表于 2014-1-9 18:45:43

检测Treg的凋亡可以用CD25high Annexin-V+ PI-

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