外周血单核细胞如何标记？

黄金右脚alex · 发表于 2014-1-7 10:06:18

各位老师前辈好，最近在做人外周血标本白细胞表面抗体流式测定，遇到这样的情况，就是所关注的病人组，如感染性休克，或炎症很剧烈的病人标本，白细胞总量很高，同时，中性粒细胞占到90%以上，往往找不到我所关注的单核细胞，加上目前使用的是Beckman XL这台机器，所以请教前辈，这台机器能否用CD来标记单核细胞，选择哪个，XL是否可以完成？目前标本是单标目标受体，PE染色，下面是中粒很多的情况图：

niwanmao · 发表于 2014-1-7 11:33:53

beckman的机器据说因为某个装置的缘故，所以单核细胞ssc特别小。单核细胞可以用CD14高表达来区分开来。

黄金右脚alex · 发表于 2014-1-7 12:15:17

niwanmao 发表于 2014-1-7 11:33
beckman的机器据说因为某个装置的缘故，所以单核细胞ssc特别小。单核细胞可以用CD14高表达来区分开来。 ...

谢谢倪老师，那具体CD14该怎么来用呢，我是新人接触流式技术。实验操作时有什么需要注意的地方呢？再次感谢您。
另外，还有个问题，就是最近几个标本，出现了图上的中性粒细胞分两群的问题，是裂解红细胞的问题么，还是中粒的凋亡呢，谢谢，再附图一张。

niwanmao · 发表于 2014-1-7 12:24:20

黄金右脚alex 发表于 2014-1-7 12:15
谢谢倪老师，那具体CD14该怎么来用呢，我是新人接触流式技术。实验操作时有什么需要注意的地方呢？再次感 ...

中性粒细胞分成两群一般是因为标本放置时间长，粒细胞发生凋亡或死亡所致。至于CD14，就是按照正常步骤标记，没有很特殊的要求，不知道你担心的是什么？

黄金右脚alex · 发表于 2014-1-8 12:36:09

niwanmao 发表于 2014-1-7 12:24
中性粒细胞分成两群一般是因为标本放置时间长，粒细胞发生凋亡或死亡所致。至于CD14，就是按照正常步骤标 ...

感谢倪老师，学习了。

黄金右脚alex · 发表于 2014-1-9 23:23:25

本帖最后由黄金右脚alex 于 2014-1-9 23:45 编辑

还有问题请教下倪老师，如果我要用CD14来标记单核细胞的话，是不是原有的流式方案还是需要再改，包括重新设门等，谢谢，是FITC还是PE呢，如果不是PE，是不是还需要调补偿呢，谢谢。

黄金右脚alex · 发表于 2014-1-9 23:23:57

本帖最后由黄金右脚alex 于 2014-1-9 23:47 编辑

还有一个问题，flowjo软件内可以调节显示的细胞数，谢谢

niwanmao · 发表于 2014-1-10 09:47:24

黄金右脚alex 发表于 2014-01-09 23:23:25

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本帖最后由黄金右脚alex 于 2014-1-9 23:45 编辑

还有问题请教下倪老师，如果我要用CD14来标

你原来什么方案？

niwanmao · 发表于 2014-1-10 09:48:29

黄金右脚alex 发表于 2014-01-09 23:23:57

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本帖最后由黄金右脚alex 于 2014-1-9 23:47 编辑

还有一个问题，flowjo软件内可以调节显示的

flowjo每个图下面有个可折叠展开的选项可以设置显示细胞数

黄金右脚alex · 发表于 2014-1-13 21:14:44

niwanmao 发表于 2014-1-10 09:47
你原来什么方案？

我原来就三管，unstain,isotype control 还有目的受体，没有特别标CD，都是PE染色

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[标本处理] 外周血单核细胞如何标记？