异倍体求教

suntree0628

本人新手，人淋巴细胞PI染色后设门，如下图所示：
第一步，分主群细胞，SSC电压低了点，应该设高些；

第二步，应用A-W分单细胞：

此门以上区域为粘连细胞，单细胞群才42.3%。。。


随后该通道A信号：


感觉有点点奇怪了，没有各周期细胞的分布。。。点了cell cycle后是这样的

请教下各位，这是因为人淋巴细胞没有典型的细胞周期分布还是其他原因？

haven_t

是BC机器的数据吧?

FL3用线性而非对数.

正常人淋巴细胞未经处理绝大部分是二倍体细胞，基本不会出现明显的S期和G2M期群体。

suntree0628

haven_t 发表于 2014-1-24 09:36
是BC机器的数据吧?

FL3用线性而非对数.

这是贝克曼的数据，荧光信号比较强，所以设门是在对数的基础上圈的。
以前没接触过人淋巴细胞的细胞周期分析，私下分析，人淋巴细胞是个稳定二倍体，G0/G1期细胞肯定是绝大多数，只是这个样本这么绝对，有点疑惑了

haven_t

suntree0628 发表于 2014-1-24 09:52
这是贝克曼的数据，荧光信号比较强，所以设门是在对数的基础上圈的。
以前没接触过人淋巴细胞的细胞周期 ...

荧光强度可以通过PMT电压进行调节，软件不一定能对对数数据进行拟合。

未经刺激的淋巴细胞的确是这样，没什么好疑惑的，不是这样才让人担心呢。

suntree0628

当时PMT已经是最低电压了。

感谢感谢

niwanmao

suntree0628 发表于 2014-1-24 13:25
当时PMT已经是最低电压了。

感谢感谢

我怀疑你圈的这堆已经不是细胞了，而是碎片。

suntree0628

niwanmao 发表于 2014-1-24 21:25
我怀疑你圈的这堆已经不是细胞了，而是碎片。

倪老师，那后面的那些粘连体怎么看？排列还是很有规律的

samly0

suntree0628 发表于 2014-1-24 09:52
这是贝克曼的数据，荧光信号比较强，所以设门是在对数的基础上圈的。
以前没接触过人淋巴细胞的细胞周期 ...

贝克曼的机子采集分析周期也是用线性的吧，FL3-H/A都用线性分析看看

niwanmao

suntree0628 发表于 2014-1-26 09:46
倪老师，那后面的那些粘连体怎么看？排列还是很有规律的

因为你这部分用LOG显示，所以可能只是假象。因为FSC、SSC太小了。

suntree0628

各位老师，感谢大家的帮助。

我把流式图做了些调整，把“第二步，应用A-W分单细胞”的图横纵坐标改了改，设为线性A-W以及A-H，还请大家帮忙分析下，此时FL3通道的电压为最低值。