荧光多色搭配

lin850424

目前实验有一个荧光多色搭配，有几个问题请教
1：机器为BD ARIA2，实验设计为5色，不能更改的荧光染料有7-AAD，PE。
2：剩余三色为FITC,CY5,APC-CY7.我认为如此搭配没有问题的，不知道有没有不同意见。
3：ARIA2有三个激光管，我只用了前两个，不是很熟悉，紫色激光的DAPI,应该是核染料吧，而且405激发光才不足10%，谁可以介绍一下具体应用啊！

niwanmao

1、这样的搭配应该没有问题：http://www.flowcyto.cn/bbs/thread-235-1-1.html

2、关于DAPI，引用维基百科的介绍如下，可能用360nm激发更好：DAPI即4',6-二脒基-2-苯基吲哚(4',6-diamidino-2-phenylindole)，是一种能够与DNA强力结合的荧光染料，常用于荧光显微镜观测[1]。因为DAPI可以透过完整的细胞膜，它可以用于活细胞和固定细胞的染色。
在荧光显微镜观察下，DAPI染剂是利用紫外光波长的光线激发。当DAPI与双股DNA结合时，最大吸收波长为358nm，最大发射波长为461nm，其发散光的波长范围含盖了蓝色至青绿色。DAPI也可以和RNA结合，但产生的荧光强度不及与DNA结合的结果，其发散光的波长范围约在400nm左右。

chymanhz

dapi用355nm比较好，不行就用375，405nm不行

lin850424

chymanhz 发表于 2014-4-2 16:47
dapi用355nm比较好，不行就用375，405nm不行

不知道是否看的清楚，这是在BD机子上配置里面照下来的，407通道明明有DAPI啊

niwanmao

lin850424 发表于 2014-4-3 21:26
不知道是否看的清楚，这是在BD机子上配置里面照下来的，407通道明明有DAPI啊 ...

并不是说405不能激发，这里面牵涉到激发效率的问题，在405nm下，DAPI的激发效率只有12％，而在360nm下面激发效率高达99％（见下图，参考文献来源：Violet Laser Diodes as Light Sources for Cytometry）