罗丹明123流式检测膜电位结果分析

cccssszzz08

倪老师，您好。好久不联系啦！
最近有师弟问我关于罗丹明123（RH123）关于线粒体膜电位的问题。在我的印象中，一直认为是荧光强度降低，也就是说在流式上出峰左移，荧光强度的平均值减小认为是膜电位降低，以前实验也都是这么做的（具体的实验操作是RH123染色后，488激发，FL1收集荧光信号）。
但是今天又查询了一下原理，发现好多资料上都介绍说RH123能以来线粒体跨膜电位进入线粒体，荧光减弱或者消失。在细胞发生凋亡时，线粒体膜电位下降，线粒体转运孔开放，染料释放出来回复强的黄绿色荧光，这样一来，实验的结果应该就是荧光强度上升才代表着线粒体膜电位的下降吧？（参考资料：http://www.doc88.com/p-194266853302.html）
关于这个问题，我感到十分困惑，希望能得到您的帮助！  谢谢

cccssszzz08

再者参考http://www.dxy.cn/bbs/topic/17246769，见贴内董十二和mornsmile两位朋友对RH123的作用机理完全相反，有没有什么比较权威的解释呢？

niwanmao

cccssszzz08 发表于 2013-10-30 10:45

                               
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倪老师，您好。好久不联系啦！
最近有师弟问我关于罗丹明123（RH123）关于线粒体膜电位的问题。在我的印象 ...

我是这么认为的：

1、罗丹明123进入线粒体的数量多少和线粒体膜电位高低确实密切相关，线粒体膜电位高，则罗丹明123进入多，保留的也越多，荧光强，反之，则荧光弱。所以罗丹明123（FL1）的荧光强弱就反映了线粒体膜电位高低。

2、你后面所说的线粒体膜电位降低，罗丹明123释放出来，导致荧光增强，我觉得不靠谱。因为凋亡的时候，线粒体膜电位降低，线粒体膜的通透性也增大了，罗丹明释放出来之后，也会直接透过细胞膜，最后被洗涤掉，所以应该不会留在细胞内部。

以上只是我的一点理解，欢迎大家讨论。
附示例：http://www.flowcyto.cn/bbs/thread-253-1-1.html

cccssszzz08

niwanmao 发表于 2013-10-30 14:45

                               
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我是这么认为的：

1、罗丹明123进入线粒体的数量多少和线粒体膜电位高低确实密切相关，线粒体膜电位高， ...

谢谢倪老师的回复，我也很支持您的说法。同时也欢迎大家一起来讨论。

657705752

niwanmao 发表于 2013-10-30 14:45
我是这么认为的：

1、罗丹明123进入线粒体的数量多少和线粒体膜电位高低确实密切相关，线粒体膜电位高， ...

倪老师，您好：
想问一下，对于动物肝脏组织线粒体膜电位的罗丹明染色，方法只有罗丹明染分离的鼠肝脏线粒体这种方法吗？染色后能否用流式检测，因为流式是过细胞的吧？线粒体这种细胞器用流式检测是否也是计数一定数量的线粒体检测荧光强度？因为有少量文献是说罗丹明染色分离出来的线粒体用流式来检测的。（荧光强度越强，膜电位越高吧？）；因为有文献说罗丹明123适合急性线粒体损伤的检测，而且检测荧光值在几分钟内的变化。

niwanmao

657705752 发表于 2017-7-14 21:48
倪老师，您好：
想问一下，对于动物肝脏组织线粒体膜电位的罗丹明染色，方法只有罗丹明染分离的鼠肝脏线 ...

罗丹明123是直接进入膜内检测线粒体膜电位的，不需要分离线粒体，具体Protocol站内有，仔细搜搜即可找到。
也可以用JC-1

657705752

niwanmao 发表于 2017-7-14 21:52
罗丹明123是直接进入膜内检测线粒体膜电位的，不需要分离线粒体，具体Protocol站内有，仔细搜搜即可找到 ...

谢谢倪老师，但我前期细胞实验是用RHO123，现在做动物实验，检测肝脏内线粒体膜电位，我看有的文献是分离刚脏组织线粒体让后RHO123染色，但有的是给出的几个时间点的曲线图，另外，线粒体能直接上流式吗？荧光强度和膜电位也还是成正比吧？

niwanmao

657705752 发表于 2017-7-17 14:46
谢谢倪老师，但我前期细胞实验是用RHO123，现在做动物实验，检测肝脏内线粒体膜电位，我看有的文献是分离 ...

分离线粒体染色我不太清楚。我们平时都是直接用完整的细胞染膜电位的。