五标管怎么设置同型/空白对照

钢蛋儿

看到帖子《荧光扣除对照（FMO）概念和示例(出处: 流式中文网)》，感觉启发很大我需要五标管：分别是
CD3--    percp-cy5.5
CD4--    FITC
CD25--  PE-cy7
FoxP3-- PE
IL-17--  Alexa Fluro647
CD3、CD4分群还好，所以可能不需要CD3或者CD4的对照，主要问题是后三者~~特别是CD25-PE-cy7，请问我是不是该这样设置：
1、空白管
2、五种单标管
3、CD3  CD4   FoxP3  IL-17 四标管
4、CD3  CD4   CD25  IL-17 四标管
5、CD3  CD4   CD25 FoxP3 四标管
6、五标管
但是这样一来是不是只能单独确定CD25的门或者Foxp3的门，到时可以同时圈出CD25、Foxp3的门吗？
脑子有点乱了~
谢谢老师指点

niwanmao

FMO主要是用在某个需要分析表达百分比，但分群不明显的指标上，多为单个指标分析而做。

对于CD25和foxP3，我做过的还是分群不错啊，不需要也问题不大的。不过抗体、破膜剂这两样一定要选好一点。

钢蛋儿

niwanmao 发表于 2014-5-22 21:02
FMO主要是用在某个需要分析表达百分比，但分群不明显的指标上，多为单个指标分析而做。

对于CD25和foxP3， ...

谢谢倪老师，您做过的是诱导的还是自然的Treg？是人的吗

niwanmao

钢蛋儿 发表于 2014-5-22 21:40
谢谢倪老师，您做过的是诱导的还是自然的Treg？是人的吗

人Treg，自然的。

钢蛋儿

niwanmao 发表于 2014-5-22 21:47
人Treg，自然的。

哦 我也是……那我主要想把CD25这一个指标的门画出来，应该可以标记一管CD3  CD4   FoxP3  IL-17四标管作为FMO吧？

钢蛋儿

另外同型对照应该也是类似的吧？
CD3  CD4   FoxP3  IL-17的抗体，再 加上CD25-PE-cy7的同型~~~还有一个问题，就是同型对照的是同一种IgG亚型和荧光，但是不是一个公司可以吗？
谢谢坛主！！

niwanmao

钢蛋儿 发表于 2014-05-22 22:50:28

                               
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另外同型对照应该也是类似的吧？
CD3  CD4   FoxP

FMO就不用同型了。