双染抗体要怎么加？

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双染时我们一般先染胞膜的，然后固定破膜再染胞内的。我现在有两个抗原，均在胞膜及胞浆表达，那么是否一开始就先固定、破膜，然后加抗体，那么抗体也要一个一个加吗，还是可以一起加进去？还有一个问题，我要用7aad染死细胞，是否在固定之前加就可以了，因为固定后细胞就都死了？

niwanmao

即使固定了，有时候胞膜位点还是可能会染上的，所以如果你要区分得很清楚，建议还是选择那种特异性针对胞膜位点或特异针对胞内位点的克隆号，分开用。

倪shunlan

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