提高流式检测免疫表型研究中的数据可靠性和可重复性

niwanmao

流式细胞术已经逐渐成为分析免疫功能的重要工具，然而，为了获得可重复和科学的数据，需要设计正确的对照和谨慎的方法学。
当前实验室中标准的做法是使用密度梯度离心法分离细胞，然后冻存起来。这步尽管避免了全血标本冻存的缺陷，但同时也去除了50％的白细胞（主要是粒细胞）。所以利用密度梯度离心法得到的数据如果要保证正确，建立在以下的假设基础上：（1）实验或疾病不影响细胞密度；（2）分离过程中免疫表型未受影响；（3）离心时只去除了粒细胞。
尽管这项技术广泛使用，但目前很少有证据支持该方法的准确性及其分离群体的纯度。
而在临床流式细胞术中，CD4＋绝对计数、CD34＋绝对计数等单平台法，其实验室间的CV值均远远小于双平台法。在一项九年的研究中，发现绝对计数是减少CD34计数CV的主要因素，这就提示我们，在研究中，采用绝对计数作为标准化，可能能够更好的减少实验误差。

下图显示了GBM（胶质母细胞瘤）和正常人之间的实验数据对比，上面这行表示用百分比来比较T和B细胞之间的差异，发现GBM患者的T细胞比正常人降低，而B细胞比正常人升高。但如果改用下面这行绝对数来比较，就会发现实际上GBM和正常人之间B细胞没有差异。




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下载（1颗流星）： Strategies for improving the reporting of human immunophenotypes by flow cytometry.pdf (510 KB, 下载次数: 8, 售价: 1 流星)

2014-9-2 21:24 上传

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