用7AAD区分死细胞的问题

cellprobe

大家好，我有一个疑惑。
我想检查肿瘤组织里面某种抗原的表达（文献的报道说这种抗原在肿瘤组织中高表达）。
抗体是用PE标记。
流式细胞仪是FACSCalibur。

实验设计：用胶原酶消化组织得到单个细胞；细胞抗体染色后，用buffer重悬；上机前细胞用7AAD染色。
PE应该用FACSCalibur的FL2检测，7AAD应该用FL3检测。


肿瘤组织里面一般都有死细胞，死的细胞容易被7AAD染色；如果用单染调节补偿的话，是不是还得找一个表达此抗原的细胞或组织作为对照？


如果找不到表达此抗原的细胞或组织的话，那就只有直接用双染做补偿了。对吗？


请大家指教。谢谢！

niwanmao

你的烦恼其实就是找不到好的阳性对照来调节补偿，这个现在很好解决，用商业化的补偿微球。

燕仔zoe

如果你正常细胞组中7-AAD表达较少、补偿难调的话，可拿一管正常对照细胞，UV照射，提高凋亡率，这样做单染的组，肯定有7-AAD的阳性的。

didi_zhou

加点双氧水就是了，很快的。

續、寫。

燕仔zoe 发表于 2014-9-5 16:29
如果你正常细胞组中7-AAD表达较少、补偿难调的话，可拿一管正常对照细胞，UV照射，提高凋亡率，这样做单染 ...

我直接用80°C的热水烫，30多秒左右，7-AAD可以染上，这个补偿可以调。