多色流式检测外周血循环肿瘤细胞

niwanmao

实体肿瘤患者外周血循环肿瘤细胞（CTCs）的存在和数量强烈提示其临床预后。迄今为止，CellSearch system是唯一获得美国食品药品监督局批准的应用于进展期乳腺癌、前列腺癌、结肠癌的CTC计数系统。然而，由于表皮细胞粘附分子（EpCAM）富集法导致该系统存在一定的敏感性缺陷。
Masaru Watanabe在Cytometr A杂志中提出了一种多色流式检测CTC的方法，可实现CTC计数，并为分子生物学特性鉴别提供基础。
文中，作者将表达不同水平EpCAM的肿瘤细胞混入健康供者外周血中。混合后的样本通过CD45磁珠阴性分选以去除白细胞，然后固定、用CD45-Alexa Fluor 700, EpCAM-PE, cytokeratin (CK)-FITC和/或7-aminoactinomycin D染色。将检测结果与预期数量进行曲线拟合，相关性非常好（slope50.760–0.888，R250.994–0.998），并且与EpCAM表达无关。
该方法检测到EpCAM－肿瘤细胞的敏感性高于CellSearch系统。并且，加入上皮-内皮转换（EMT）标记，可检测到EpCAM-/CK-细胞和EMT诱导肿瘤细胞。
总之，多色CTC检测可高效地检测以前未认识到的CTC群体。

部分结果图片见下，详细方法学部分参见原文PDF的method部分：

图1

https://flowcyto.cn/bbs/forum.php?mod=attachment&aid=NjgxM3w5NTM3M2FhNHwxNzM0ODkxMzkxfDB8

ruthyhx

好文章，不知有原文吗

ruthyhx

这个用流式就行，不用买其他仪器吧，除了磁珠分选
比如cell search什么的

niwanmao

ruthyhx 发表于 2014-10-24 11:13
好文章，不知有原文吗

原文就在上面正文最后，免费在线阅读那里。

niwanmao

ruthyhx 发表于 2014-10-24 13:54
这个用流式就行，不用买其他仪器吧，除了磁珠分选
比如cell search什么的

是的。

花生小将99

请教一个问题，我现在要用免疫磁珠负向富集加流式法检测CTC，流式检测的时候我用CD45染一色去除白细胞干扰，剩下抗体的染一色确定CTC，那如果剩下的那些抗体（4种）比如有的细胞同时表达Epcam和CK，那对我最终CTC的比例和数量有没有影响呢，重合的那部分会不会重复计数呢，谢谢解答哈

niwanmao

花生小将99 发表于 2017-11-13 13:39
请教一个问题，我现在要用免疫磁珠负向富集加流式法检测CTC，流式检测的时候我用CD45染一色去除白细胞干扰 ...

不是很理解你表达的意思，你是指每种抗体染一管？
你应该是这几种抗体一起染一管才对。

花生小将99

niwanmao 发表于 2017-11-13 13:57
不是很理解你表达的意思，你是指每种抗体染一管？
你应该是这几种抗体一起染一管才对。 ...

是染一管，只是是两色的，比如APC染色CD45去除白细胞干扰，剩下的抗体比如Epcam，CK都用PE染色检测CTC，可是假如有的CTC是同时表达这两个抗体的话，流式最终计数CTC的时候会不会重复计数，把Epcam和CK共表达的部分计数两次呢？

niwanmao

花生小将99 发表于 2017-11-13 19:23
是染一管，只是是两色的，比如APC染色CD45去除白细胞干扰，剩下的抗体比如Epcam，CK都用PE染色检测CTC， ...

为什么不同时标记进去？把所有的抗体放一管不就行了

花生小将99

niwanmao 发表于 2017-11-14 08:16
为什么不同时标记进去？把所有的抗体放一管不就行了

可能我说的不太明白，是同时标记放一管检测的，不过我是用两色法的，等于有几个抗体同时染一色，然后我想知道如果这几个抗体存在共同表达的情况，到时候流式计数的时候共同表达的那部分会不会重复计数呢。