流式细胞仪怎么区分血小板和红细胞的？

niwanmao

标题：流式细胞仪怎么区分血小板和红细胞的？

流式细胞仪怎么区分血小板和红细胞的？有没有流式图？谢谢！

回答者：niwanmao

借用网上一张现成的图解说一下：

只要在检测时把FSC和SSC均设置为Log检测模式，即可大致区分红细胞和血小板（见下图）。
其实图中标记的WBCs and RBCs这部分基本上都是红细胞。

为了更好的区分红细胞和血小板，可以加上CD61和GPA，在下面这幅图的基础上，进行第二次设门。例如，在platelets门的基础上画第二张图，选择CD61阳性的细胞，即全部为血小板；在WBCs and RBCs门的基础上画第二张图，选择GPA阳性的细胞，即全部为红细胞。这样，就能非常纯的分出这两类细胞了。

典型的血小板获取图

2009年8月12日 0:54

清言

尊敬的版主，最近使用流式检测红细胞上的CD55和CD59，总做不好，阳性率太低，80%左右，不知道什么原因，总觉得设门有问题，想看看您这张图红细胞和血小板方位如何，但是也看不到，请帮忙一下，谢谢！

niwanmao

清言 发表于 2012-8-21 20:32

                               
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尊敬的版主，最近使用流式检测红细胞上的CD55和CD59，总做不好，阳性率太低，80%左右，不知道什么原因，总 ...

OK，已重新上传图片，就是将FSC和SSC均设置成LOG模式，取最右上角那群就是红细胞。

清言

请问站长，这张图哪群细胞才是红细胞呢？上面一群还是下面一群，还是电压不够没调出来？谢谢~ 祝工作开心

niwanmao

清言 发表于 2012-8-21 20:32

                               
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尊敬的版主，最近使用流式检测红细胞上的CD55和CD59，总做不好，阳性率太低，80%左右，不知道什么原因，总 ...

@清言 我这边做CD55、CD59一直都挺好的，我们用的是BD Pharmingen的CD59 FITC和CD55 PE，因为CD55相对表达较弱，所以我选择了PE标记。在处理上，记住取10ul红细胞加入500－1000ul PBS中，然后再取10ul加入已加好抗体（20ul CD59 FITC和20ul CD55 PE）的管子中，最后加入50ul PBS使反应体积达到100ul。

清言

niwanmao 发表于 2012-8-21 20:43

                               
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@清言 我这边做CD55、CD59一直都挺好的，我们用的是BD Pharmingen的CD59 FITC和CD55 PE，因为CD55相对表 ...

我也是用的同样的产品，那还需要同型对照吗？

niwanmao

清言 发表于 2012-8-21 20:43

                               
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请问站长，这张图哪群细胞才是红细胞呢？上面一群还是下面一群，还是电压不够没调出来？谢谢~ 祝工作开心 ...

哇，你们在用美天旎的MACSQUANT？这机器有点贵的。

看你获取的模式似乎是用的HYPERLOG模式，这种模式下分布可能略有不同，建议采用普通的LOG模式试试。

niwanmao

清言 发表于 2012-8-21 20:54

                               
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我也是用的同样的产品，那还需要同型对照吗？

摸索条件时可以用同型对照，同时把正常人红细胞的CD55、CD59调节到10E2左右。条件摸索成熟后，就不需要同型对照，用这个条件就可以看到如果出现CD55、CD59的降低，会出现Ⅱ类或Ⅲ类细胞。

清言

niwanmao 发表于 2012-8-21 21:00

                               
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哇，你们在用美天旎的MACSQUANT？这机器有点贵的。

看你获取的模式似乎是用的HYPERLOG模式，这种模式下 ...

呵呵，我再试试吧，那请问测CD55和CD59 还需要同型对照吗？ 还有使用流式进行血液病的免疫分型是否均需要进行同型对照？自身对照可否？真是麻烦版主了，谢谢谢谢~~~

niwanmao

清言 发表于 2012-8-21 21:05

                               
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呵呵，我再试试吧，那请问测CD55和CD59 还需要同型对照吗？ 还有使用流式进行血液病的免疫分型是否均需要 ...

CD55、CD59条件设立好就不需要同型对照了，上面回答了。

免疫分型建议使用自身细胞内对照，因为不同患者不同细胞群阴性区域均存在一定差异，用同型对照不准确。所谓内对照，就是淋巴细胞表达的而粒细胞不表达的抗原，就用粒细胞作为阴性对照；反之，就用淋巴细胞做对照。