基于红绿荧光分选活细胞置于96孔板中qPCR检测问题

hyl0810073

   细胞来源于组织消化。是Rosa小鼠，可自发红色荧光。在cre介导下，某些细胞表现为绿色。 我的课题需要获得这部分绿色的细胞。基于这个荧光的话进行分选的话有哪些需要注意的，可以提高分选的效率。对于这部分绿色细胞还有的特点是：细胞直径12-17um,细胞核大于红的细胞，DNA含量是4N。（我看到niwanmao版主回复别人问题时提到：红光和绿光之间会有补偿存在，只有调节好补偿就可以分析。补偿值如果能找到单阳性的细胞做补偿参照那是最好，如果没有单阳性，可以根据经验调节。）分选出这部分细胞在将其打入96孔板中，有那些方式可以提高效率。我在群里查了一部分，好像很多这类的问题，高分悬赏，希望在这个问题上可以解决。

hyl0810073

没能上传图片，抱歉了

niwanmao

你在分选时是直接根据红、绿自发荧光分选吗？如果DNA含量可以区分，似乎HOECHST染料应该也可以用吧

hyl0810073

niwanmao 发表于 2014-12-5 14:23
你在分选时是直接根据红、绿自发荧光分选吗？如果DNA含量可以区分，似乎HOECHST染料应该也可以用吧 ...

根据红、绿自发荧光分选的，也和分选的老师说了DNA含量4N，筛选的具体内容我不清楚。但是效率很低。只有2%的绿色细胞

niwanmao

hyl0810073 发表于 2014-12-5 14:35
根据红、绿自发荧光分选的，也和分选的老师说了DNA含量4N，筛选的具体内容我不清楚。但是效率很低。只有2 ...

DNA含量4倍体，如果没有染核酸染料也看不出的，可能只是纯粹根据红绿自发荧光分选。因为没有图，所以不知道当初设门或补偿是不是有问题。有图是最好的了。

hyl0810073

hyl0810073 发表于 2014-12-5 14:35
根据红、绿自发荧光分选的，也和分选的老师说了DNA含量4N，筛选的具体内容我不清楚。但是效率很低。只有2 ...

细胞是生殖细胞，处于减数第一次分裂前期。DNA含量是4N

hyl0810073

等会  我取找图

hyl0810073

niwanmao 发表于 2014-12-5 14:36
DNA含量4倍体，如果没有染核酸染料也看不出的，可能只是纯粹根据红绿自发荧光分选。因为没有图，所以不知 ...

我要求的绿色细胞数目不多，能否控制严格一点来使得绿色细胞更加纯净一点。

niwanmao

hyl0810073 发表于 2014-12-5 14:46
我要求的绿色细胞数目不多，能否控制严格一点来使得绿色细胞更加纯净一点。 ...

所以我觉得还是得看当时分选的图。可能没圈对，2％实在太低了。

hyl0810073

niwanmao 发表于 2014-12-5 14:36
DNA含量4倍体，如果没有染核酸染料也看不出的，可能只是纯粹根据红绿自发荧光分选。因为没有图，所以不知 ...

细胞核的直径比一般细胞的要大很多。能根据这个再设定一直门控吗