请教FLUO-3AM测钙离子浓度分析的问题2

niwanmao

标题：请教FLUO-3AM测钙离子浓度分析的问题2

谢谢niwanmao老师的解答，有直方图，我分析了波长525nm时的荧光强度，得到了我想要的结果，但是只是一组样本，请教一下用多大的波长分析比较合适比较有说服力呢，另外您说的通过多个已知钙离子浓度和对应的荧光强度，也可以绘制出标准曲线，能具体告知我方法吗，谢谢啦

回答者：niwanmao[

1. 表达不正确，应该是取525nm波长的荧光强度。没错，是用525nm。
2. “通过多个已知钙离子浓度和对应的荧光强度绘制标准曲线”就是：
   1. 细胞按照普通方法先进行Fluo-3 AM染色。
   2. 用Cell Loading Medium洗涤一次。
   3. 以5*10⁵/ml的密度重悬细胞。
   4. 预先配制10个和更多个已知浓度的钙离子溶液（如6nM、10nM、20nM、1uM等等），将10管细胞分别与这10个已知浓度的钙离子溶液孵育1－2小时。
   5. 上机检测。将取到的525nm荧光强度与钙离子浓度值做成曲线图。

上面步骤中曲线图示例见http://www.flowcyto.cn/question.php?qid=158的第9页，Cell loading medium也在第9页的最下方。

2009年8月12日 0:54