FSC\\SSC图上，淋巴细胞分两群情况

一成天

请教各位老师和同仁:
在用FSC/SSC作图时，经常时不时的能看到淋巴细胞在FSC/SSC图上分成了左右两群（单核细胞FSC也比较大）。


昨天我特意找的两个正常体检人的标本，同时标了CD3-FITC和HLA-DR-PE，
结果发现：
（1）左右两群的CD3都阳性表达（判断左右两群均为淋巴细胞）；
（2）左群淋巴细胞HLA-DR表达不明显，右群HLA-DR明显表达（判断：右群T活化，左群T未活化）。


这是两个不同的健康体检的正常人标本，（均为男性，50岁和51岁）。
那么，问题来了——————————为何会出现这种左右两群T细胞的活化状态明显不同的情况呢
(图中G2=R2，笔误。应为G4=R4)

niwanmao

标本有没有经过固定？用什么东西固定？

一成天

niwanmao 发表于 2014-12-16 12:37
标本有没有经过固定？用什么东西固定？

没有固定。抗体标记后直接溶血
溶血素用的是BD公司4色淋巴细胞亚群试剂盒里的10X 浓缩液配的。
溶血后用自配PBS洗涤一次，离心，上机

一成天

niwanmao 发表于 2014-12-16 12:37
标本有没有经过固定？用什么东西固定？

两个标本均为当日新鲜采集标本，莫非前处理会导致T细胞活化？
从UR象限的%Gated的结果看，两个标本的淋巴细胞左右两群的活化T是未活化T的大约均为2.5倍的样子。

niwanmao

一成天 发表于 2014-12-16 13:07
两个标本均为当日新鲜采集标本，莫非前处理会导致T细胞活化？
从UR象限的%Gated的结果看，两个标本的淋巴 ...

有时候淋巴细胞大小发生改变是活化导致的，但是，按照你的描述，这种情况应该基本上每个标本都有，所以我估计还是溶血素的问题，BD的溶血素含有固定成分。你可以尝试自己配置氯化铵裂解液试试，应该会使淋巴细胞变成一群。

一成天

niwanmao 发表于 2014-12-16 13:21
有时候淋巴细胞大小发生改变是活化导致的，但是，按照你的描述，这种情况应该基本上每个标本都有，所以我 ...

好的，待实际体会一段时间后，再来反馈，感谢倪老师