请问有没有关于检测免疫细胞中 FcR （I,II,III)和PD-1/PDL1表达...

zark_00

请问有没有关于检测免疫细胞中 FcR （I,II,III)和PD-1/PDL1表达的文献。

计划测小鼠脾中，CD4 T, CD8T, B，NK, 巨噬，树突细胞上的 FcR （I,II,III)和PD-1/PDL1表达。抗体也有，但目前做出来没有文献对照参考，也在pubmad上查过，没找到。请问倪老师是否有这方面的文献。


另外还有些问题：


NK的抗体用的是CD49b Biolegend的IgM,与CD3合用，做出来 CD3 VS CD49b图上，CD3-CD49b+方向，有大量的CD3-CD49b+细胞，但不成群，不像说明书上那样是独立的NK群体。抗体已经是按推荐用量了，应该不是不够。而之前用BD的CD49b，做出来就很好。请问倪老师这可能是什么原因。因为这次没有订CD45,所以就直接按CD3CD49b这样来筛，是否因为没有用CD45筛过，造成这样的结果？还是有可能是抗体的问题


不知道小鼠的巨噬细胞富集器官组织有哪些，我用脾做了两次，用CD11b和F4/80双染，用CD3和F4/80双染，都没发现有很明显的巨噬细胞群体。查过文献，一般是灌肺收集肺里的细胞悬液，或者腹腔打肉汤刺激收腹水。但我问做切片和组化的人，都说在脾中HE染能看见不少的巨噬细胞。请问倪老师，我该选哪个（脾是最方便的，也能一份样本做多个指标），还有就是有没有流式测小鼠巨噬细胞的文献，好有个参考。


谢谢

v2002lichao

用葡聚糖灌肺刺激，之后取肺，进行肺泡盥洗，收集肺泡灌洗液离心，培养细胞。之后收集贴壁细胞。这样巨噬细胞会比较多。

niwanmao

不知道你为什么用CD49b标记NK细胞，CD49b我记得不是巨核细胞和血小板的标记吗？
此外，T淋巴细胞能检测到多少FcR？单核/巨噬细胞是肯定可以，NK细胞也有，但T细胞我倒是不清楚。

zark_00

niwanmao 发表于 2015-2-1 11:17
不知道你为什么用CD49b标记NK细胞，CD49b我记得不是巨核细胞和血小板的标记吗？
此外，T淋巴细胞能检测到多 ...

小鼠的NK marker ，有的用NK1.1 有的用CD49b(DX5)，但NK1.1对有些品系的小鼠效果较差，所以想通用，就用CD49b，摘录一段Biolegend的介绍和图

DX5 antigen has been recently characterized as CD49b. It is a 150 kD integrin α chain also known as α2 integrin, VLA-2 α chain, and integrin α2 chain. CD49b non-covalently associates with CD29 (β1 integrin) to form the CD49b/CD29 complex known as VLA-2, a receptor for collagen and laminin. CD49b is expressed on platelets, the majority of NK cells, NKT cells, and a small subset of CD8+ T cells (this population can be significantly increased following viral infection). DX5 is used for the identification and isolation of NK cells, and is especially useful for identifying NK cells in mice lacking the NK1.1 antigen.



我做出来就不是成群的，虽然这图是NK1.1和DX5双染，我做出来就像这图DX5单阳区域一样，事件很多，但不成群

niwanmao

zark_00 发表于 2015-2-1 19:29
小鼠的NK marker ，有的用NK1.1 有的用CD49b(DX5)，但NK1.1对有些品系的小鼠效果较差，所以想通用，就用C ...

因为血小板也是一个很大的表达群体，所以，我个人觉得如果你要用CD49b，那么最好还是加上CD41或CD61等血小板抗原，来排除血小板的干扰。