临床9色和10色流式细胞术（六）：数据分析和总结

niwanmao

流式中文网编译自Brent Wood. 9-Color and 10-Color Flow Cytometry in the Clinical Laboratory.Arch Pathol Lab Med—Vol 130, May 2006

数据分析
多色流式的可视化和分析很复杂，故需要改良的分析软件来提高效率。目前的流式分析软件大部分通过显示所有二维参数图让你逐级设门。但实际上我们分析时可能只用到少量有用的二维散点图，每个图都可以用不同颜色显示各群细胞，这种方法也是实现多维分析的一个间接方法。
用密度图可进一步增加信息量，结合多色设门，可能会发现更多有价值的信息。
对于9色实验，可产生55个不重复的散点图（如图8所示），对于白血病和淋巴瘤的诊断，这是模式识别的一个步骤，要从这些散点图中看出与正常细胞分布不同的地方。

图8

图8. 9色流式细胞术需要55个散点图显示所有11个参数，显示了多色流式的高信息含量。主要细胞群用不同颜色显示。


白血病、淋巴瘤推荐筛查方案
适合正常造血细胞分化和临床血液肿瘤诊断的筛查方案见表2。


监测治疗过程中异常细胞群是多色流式细胞术非常重要的应用，图9就是利用表2中的抗体组合检测急性单核细胞白血病治疗后异常单核细胞群。

图9

图9. 微小残留病灶检测。 一名新近接受治疗过的急性单核细胞白血病患者的标本，可见残留的异常幼稚单核细胞群（淡蓝色），提示白血病未缓解。


图10则显示了慢性粒细胞白血病慢性期多系分化异常的特点。原始细胞群不仅有异常粒系分化特征，还存在CD7异常表达、CD117表达增高、CD13表达降低等特点；B细胞分化亦存在异常，显示为CD38表达强度降低和CD10表达增高。

图10

图10. 慢性粒细胞白血病慢性期。CD45/SSC散点图可见原始细胞区域存在异常原始粒细胞（红色）和异常幼稚B细胞（淡蓝色），提示该疾病的干细胞来源。需要注意的是，嗜碱粒细胞（灰色）比例增高是骨髓增殖性疾病的特征之一。


在图11中，淋巴瘤患者的脑脊液中发现小群单克隆B细胞群，这种细胞少的标本本来很难做出结果，但利用多色流式，一管就可以把抗体都做掉，就很容易区分出淋巴瘤细胞。

图11

图11. 脑脊液中可见少量异常细胞。小群的克隆性B细胞（淡蓝色）高表达CD20，kappa轻链限制性表达，约占总数的0.7％。提示淋巴瘤细胞累及。

图12

图12. 异常浆细胞检测。可见非常少量的浆细胞（蓝色），约占总数的0.05％。这类异常细胞CD45、CD19表达降低，CD56阳性，胞内kappa轻链限制性表达，而且，其DNA含量增高，提示异倍体。提示预后差。


以上这么多指标，只要单管100ul标本即可，并且可以检测出如图12这样0.05％微量的异常细胞，充分显示了多色流式的能力。


总结
与4色或更少颜色的流式相比，多色流式能够提供更精确的区分能力、能够从少细胞标本中获取更多的信息、增加了实验室效率、能够在低水平检测到异常细胞。这些特性尤其适合白血病和淋巴瘤的临床检测。多色流式势必将成为主流。