annexin V-apc和7-AAD凋亡问题

fdgg012345

老师好，今天做了凋亡，药物处理肿瘤细胞24h，如上图，基本没有凋亡细胞。但是分群比较明显。请问：
1.分群明显，是不是说试剂或者步骤没什么问题，可能是细胞的确没有凋亡？
2.按以上设门，十字划得是否正确，要怎么调整？
谢谢。@niwanmao

niwanmao

请问你使用的肿瘤细胞是不是贴壁细胞？

fdgg012345

niwanmao 发表于 2015-3-13 08:39
请问你使用的肿瘤细胞是不是贴壁细胞？

是贴壁细胞，肠癌SW480.

fdgg012345

niwanmao 发表于 2015-3-13 08:39
请问你使用的肿瘤细胞是不是贴壁细胞？

死细胞有些多，我没有收集上清液中的脱落细胞，感觉死细胞比例不会这么高。会不会消化吹打损伤使原本凋亡细胞变成了死细胞。

niwanmao

fdgg012345 发表于 2015-3-13 23:27
死细胞有些多，我没有收集上清液中的脱落细胞，感觉死细胞比例不会这么高。会不会消化吹打损伤使原本凋亡 ...

如果是贴壁细胞，那么上清液中的脱落细胞就是代表活力不好的细胞甚至死细胞，所以这种结果是意料之中的。

建议贴壁细胞尽可能不用annexin V，而是改用细胞周期测subG1代表凋亡或者测线粒体膜电位、caspase-3等指标。