flowjo处理数据阴性样和阳性样设门后横坐标显示范围不一样

decade911

1.使用的是从BD C6上导出的流式数据，未补偿过；
2.散点图的范围调整了，全部选取后设门；
3.批处理后，发现阳性样的横坐标轴变了，相应的门对应的横坐标值也变了，一会6次方，一会7次方。上次处理过类似的数据，没出现这个情况，我把上回的数据按之前的模板又弄了一次，结果也是这个样子。怀疑是范围问题，但上网查过教程，也操作过，还是没解决。
求大神帮忙释疑，困惑好几天了。

阴性样

阴性样

阳性样-1，横坐标轴变化

阳性样2

niwanmao

C6的数据格式和坐标范围不同，所以在flowjo中可能显示不是很好，可以艾森novoexpress试用版看看（http://www.flowcyto.cn/bbs/article-62-1.html），应该没有问题。

chymanhz

如果是flowJo就用10,。0版本的，7.6对超过10^5数据有问题。或者用ACEA的novoExpress

decade911

niwanmao 发表于 2015-3-14 17:49
C6的数据格式和坐标范围不同，所以在flowjo中可能显示不是很好，可以艾森novoexpress试用版看看（http://ww ...

谢谢倪老师，实在不行我就用c6处理算了。奇怪的是前一次的数据处理没问题，这次的就横坐标轴乱变，不一致了。
用diva处理应该也没有问题吧？

decade911

chymanhz 发表于 2015-3-14 19:32
如果是flowJo就用10,。0版本的，7.6对超过10^5数据有问题。或者用ACEA的novoExpress ...

我试试吧。谢谢了，困扰好几天了。

niwanmao

decade911 发表于 2015-3-14 20:48
谢谢倪老师，实在不行我就用c6处理算了。奇怪的是前一次的数据处理没问题，这次的就横坐标轴乱变，不一致 ...

Diva显示不好。

decade911

niwanmao 发表于 2015-3-15 11:30
Diva显示不好。

    谢谢倪老师，那我直接用bd c6配套的软件处理，应该没什么问题了吧。另外我的CFSE阴性样的荧光直方图正常吗？感觉荧光强度值有点高啊。
    还有如下问题想请教：1.用流式能不能鉴别出一群细胞中的雄性细胞啊，或者说Y染色体，我打算用雄性细胞移植入雌性动物中，再检测雄性细胞来示踪；2.对于提前荧光标记后进行移植的细胞，一段时间后用流式检测，阴性对照如何设置（我考虑到流式一般是事后标记，对于这种提前荧光标记的细胞没法设置阴性对照了，用同样移植但没荧光标记的其他组动物细胞做阴性是否可行？）。
   希望能得到您的回复。

niwanmao

decade911 发表于 2015-3-15 21:30
谢谢倪老师，那我直接用bd c6配套的软件处理，应该没什么问题了吧。另外我的CFSE阴性样的荧光直方图 ...

1、可以借鉴分选X、Y精子的思路，参见本帖讨论：http://www.flowcyto.cn/bbs/thread-2882-1-1.html

2、荧光标记示踪，你指的是你上面的CFSE标记吧？阴性对照也应该是同种细胞才对啊。

decade911

niwanmao 发表于 2015-3-16 08:58
1、可以借鉴分选X、Y精子的思路，参见本帖讨论：http://www.flowcyto.cn/bbs/thread-2882-1-1.html

2、 ...

我是把细胞荧光标记后移植入动物体内，过一段时间再取出跑流式，可是同一只移植的细胞都染上色了，也就没法设置未染色的阴性对照了，所以考虑用移植未染色细胞的另一只小鼠的细胞做阴性对照，不知这样是否可行。或者说如果用EGFP标记的细胞做动物移植的示踪细胞（需要注射进动物体内），过一段时间后如何检测这群细胞在所有细胞中的阳性率？有点绕，请包涵。

niwanmao

decade911 发表于 2015-3-16 09:17
我是把细胞荧光标记后移植入动物体内，过一段时间再取出跑流式，可是同一只移植的细胞都染上色了，也就没 ...

可以用荧光标记植入前的细胞作为阴性对照，将那个对照保存于4℃，也可以上样后，用同样电压获取植入后的细胞标本。