测定流式前细胞是否可以固定

yelinghao215

我是将包有荧光染料的靶向输送载体与肿瘤细胞孵育4小时后，PBS清洗细胞三遍，胰蛋白酶消化收集细胞并用PBS清洗三遍，在测定流式之前我可不可以先用多聚甲醛固定呢？因为流式细胞仪不在学校，需要两个小时路程。不知道多聚甲醛固定以后会不会对摄取进入胞内的荧光有影响。

niwanmao

多聚甲醛对于表面标记固定比较好，你这种应该对时间要求比较高，而且固定对载体也没有用，所以我觉得不行，还是应该准时测。

你们学校里面为什么会没有流式细胞仪啊

yelinghao215

我们实验室因为空间太小就搬离本部了，所以距离很远。我是想知道摄取进入细胞内部的荧光在固定后会泄露吗？

yelinghao215

用多聚甲醛固定后的细胞不用PBS洗可以直接进流式吗？

niwanmao

yelinghao215 发表于 2015-3-30 16:36
我们实验室因为空间太小就搬离本部了，所以距离很远。我是想知道摄取进入细胞内部的荧光在固定后会泄露吗？ ...

固定会导致细胞膜孔变大，使外部染料可以进入胞内，如果胞内载体是游离状态，也可能会漏出去。我觉得还是不固定的好。

yelinghao215

niwanmao 发表于 2015-3-30 17:15
固定会导致细胞膜孔变大，使外部染料可以进入胞内，如果胞内载体是游离状态，也可能会漏出去。我觉得还是 ...

好的，谢谢老师，我打算做两份，一份固定一份不固定的，4%多聚甲醛可以直接进流式吗？

niwanmao

yelinghao215 发表于 2015-3-30 17:21
好的，谢谢老师，我打算做两份，一份固定一份不固定的，4%多聚甲醛可以直接进流式吗？ ...

多聚甲醛固定后，上机前需要PBS洗涤。