FMO实例分析

十二郎

倪老师好，请教一个FMO的问题，附上两个文件图一为CD93的单标，是不是单标补偿做的不好？阴阳性没有分开的感觉。

图二是CD93的FMO，依据CD93的FMO划分CD93的阴阳性时，当应用到对照组及实验组后，显示为图三和图四。
图五为CD23的FMO，阴阳性分开明显，
图六是CD23的FMO，依据CD23的FMO划分CD23的阴阳性时，当应用到对照组及实验组后，显示为图七和图八。
问题如下：1：CD93的单标补偿没有调好，即阴阳性没有分开，所以对照组及实验组采用CD93的FMO来划分阴阳性也是不合适的，这样理解对不对？
                 2：CD23的单标补偿还可以，对照组和实验组采用CD23的FMO来划分阴阳性是合适的，这样理解对不对？

图1到图4

图五到图八

十二郎

图五是CD23的单标，上面描述有误

niwanmao

能否将您的完整配色方案写出来？

十二郎

niwanmao 发表于 2015-4-11 11:51
能否将您的完整配色方案写出来？

倪老师，原始数据及参考文献流式图已压缩

十二郎

niwanmao 发表于 2015-4-11 11:51
能否将您的完整配色方案写出来？

倪老师原始数据及参考已上传

niwanmao

十二郎 发表于 2015-4-11 20:50
倪老师，原始数据及参考文献流式图已压缩

看了下你的数据文件，和你传上来的图是一样的。
无论是CD93还是CD23，都出现FMO没法反映背景荧光水平的问题，只不过CD93特别明显。

我考虑可能性如下：
1、CD93和CD23未正确滴定，实验管中的阴性峰右移与抗体过量有关。建议进行抗体用量滴定。
2、CD93和CD23存在明显的非特异性染色，纯粹FMO背景荧光没法完全排除，建议在FMO管中再加一个同型对照。

以上可能性中，我个人觉得1的可能性更大，你可以在实验中逐一排除。

culturelily

CD93未分群
FMO不是万能的，必须事先排除非特异性染色

十二郎

culturelily 发表于 2015-4-23 15:06
CD93未分群
FMO不是万能的，必须事先排除非特异性染色

谢谢   就是必须要做isotype了