流式细胞术的样本制备和实验设计

niwanmao · 发表于 2015-4-17 11:11:43

『流式中文网』翻译并总结
视频讲座讲解了4个方面的内容：

1. 细胞来源和细胞悬液制备
2. 标本处理
3. 对照的设置以及使信号最大化
4. 如何选择和使用抗体

一、细胞来源和细胞悬液制备

全血标本：
1. 选择抗凝剂时要注意你要检测的抗原是否受抗凝剂中的组分影响？例如一些CD41抗体对EDTA非常敏感。
2. 裂解液的选择，可选择自配的氯化铵裂解液（http://www.flowcyto.cn/bbs/thread-178-1-1.html）或者商业化含固定成份的裂解液，但是要需要注意个别抗体可能会受裂解液中某种组分影响。大多数裂解液对所有种类的红细胞均有用，但某些病理性疾病标本或禽流感标本中有核红细胞可能很难裂解。
3. 血浆中是否存在干扰性物质。最典型的例子就是标记B细胞表面的免疫球蛋白，由于血浆中的Ig会影响抗体结合，所以需要事先用大体积的缓冲液洗涤至少3次。

PBMC：
全血标本用Ficoll密度梯度离心后提取出来的单个核细胞，包含淋巴细胞、单核细胞，可用于培养或直接分析。
缺点就是可能会丢失其中某些稀有细胞。

细胞株：
尽管细胞可能会处于不同周期，但细胞群比较同质。

从实体组织制备细胞悬液：
典型的标本是淋巴结、脾脏、肝脏等。
利用物理方法或者酶消化法（如胶原酶）制备。但是酶可能会破坏细胞表面抗原表达。
需要注意的是组织中有些细胞可能不能有效解离出来，例如免疫组化方法可发现脾脏中存在许多F4/80+的巨噬细胞，但在流式中很少看到。

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wmingzhen · 发表于 2015-4-17 15:52:18

学习了。谢谢分享。

tianpaopao · 发表于 2015-4-20 09:11:39

视频为什么一直缓冲不出来？

niwanmao · 发表于 2015-4-20 10:29:07

tianpaopao 发表于 2015-4-20 09:11
视频为什么一直缓冲不出来？

我这边电信网络，2秒就出来了。

向前 · 发表于 2015-4-30 09:10:13

您好，倪老师，想请教您一下，甲醇与皂素穿膜两者的区别。还有就是染色体积为什么尽量用小体积？

niwanmao · 发表于 2015-4-30 10:50:06

向前发表于 2015-4-30 09:10
您好，倪老师，想请教您一下，甲醇与皂素穿膜两者的区别。还有就是染色体积为什么尽量用小体积？ ...

甲醇对表面标记影响很大，而皂素则温和。
染色体积尽量小，并非严格要求，小则抗体用量少，节省抗体，你要用大体积也可以关键是抗体的浓度保持一致就行。

52127172 · 发表于 2015-9-17 17:29:30

为什么我点视频没反应？{:soso_e101:}

chainn · 发表于 2015-9-21 00:01:19

老师，视频打不开，不知在其他网站可否看到？或是有其他办法可以看吗？万分感谢！

niwanmao · 发表于 2015-9-21 12:25:30

chainn 发表于 2015-9-21 00:01
老师，视频打不开，不知在其他网站可否看到？或是有其他办法可以看吗？万分感谢！ ...

正常的，貌似跟网络有关，请再试试

@chainn @52127172

mcdfish · 发表于 2016-1-25 13:50:33

谢谢老师分享，学习了。

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niwanmao niwanmao 当前离线积分 35158	发表于 2015-4-17 11:11:43 \| 显示全部楼层 \|阅读模式『流式中文网』翻译并总结视频讲座讲解了4个方面的内容： 1. 细胞来源和细胞悬液制备 2. 标本处理 3. 对照的设置以及使信号最大化 4. 如何选择和使用抗体一、细胞来源和细胞悬液制备全血标本： 1. 选择抗凝剂时要注意你要检测的抗原是否受抗凝剂中的组分影响？例如一些CD41抗体对EDTA非常敏感。 2. 裂解液的选择，可选择自配的氯化铵裂解液（http://www.flowcyto.cn/bbs/thread-178-1-1.html）或者商业化含固定成份的裂解液，但是要需要注意个别抗体可能会受裂解液中某种组分影响。大多数裂解液对所有种类的红细胞均有用，但某些病理性疾病标本或禽流感标本中有核红细胞可能很难裂解。 3. 血浆中是否存在干扰性物质。最典型的例子就是标记B细胞表面的免疫球蛋白，由于血浆中的Ig会影响抗体结合，所以需要事先用大体积的缓冲液洗涤至少3次。 PBMC：全血标本用Ficoll密度梯度离心后提取出来的单个核细胞，包含淋巴细胞、单核细胞，可用于培养或直接分析。缺点就是可能会丢失其中某些稀有细胞。细胞株：尽管细胞可能会处于不同周期，但细胞群比较同质。从实体组织制备细胞悬液：典型的标本是淋巴结、脾脏、肝脏等。利用物理方法或者酶消化法（如胶原酶）制备。但是酶可能会破坏细胞表面抗原表达。需要注意的是组织中有些细胞可能不能有效解离出来，例如免疫组化方法可发现脾脏中存在许多F4/80+的巨噬细胞，但在流式中很少看到。购买主题已有 350 人购买本主题需向作者支付 2 流星才能浏览
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