CD3分群不明显

gaga1989xl

向各位请教为何所标记的CD3-APC分群非常不明显，是与细胞状态有关还是抗体有关？或者是电压参数没有调好？谢谢，见图！

小憨

看上去电压调的没问题，考虑一下前两个原因吧。补个阳性对照就知道是抗体还是细胞的问题了。作图的时候荧光通道选对了没？如果都没问题的话那可能你的样品就是这个特点。

gaga1989xl

小憨 发表于 2015-4-18 10:05
看上去电压调的没问题，考虑一下前两个原因吧。补个阳性对照就知道是抗体还是细胞的问题了。作图的时候荧光 ...

好的，通道应该没有问题，细胞是CD3刺激后的正常人外周血单个核细胞，应该不会是这样的，下次做个阳性对照看看，非常感谢！

niwanmao

gaga1989xl 发表于 2015-4-18 18:48
好的，通道应该没有问题，细胞是CD3刺激后的正常人外周血单个核细胞，应该不会是这样的，下次做个阳性对 ...

CD3刺激后再用CD3标记，会不会已经是被CD3结合掉，所以标不上？

ddn111

CD3刺激抗体是功能性抗体，和结合特性的抗体是不同表位，应该不存在竞争的可能吧！楼主实验设个阳性对照看看抗体本身有没有问题？

gaga1989xl

niwanmao 发表于 2015-4-18 20:48
CD3刺激后再用CD3标记，会不会已经是被CD3结合掉，所以标不上？

这个也想过了，查看了一下刺激抗体的克隆号（OKT3）和流式克隆号(BW##)，两者是不同的,这样应该不会存在标不上的可能吧？

gaga1989xl

ddn111 发表于 2015-4-18 23:31
CD3刺激抗体是功能性抗体，和结合特性的抗体是不同表位，应该不存在竞争的可能吧！楼主实验设个阳性对照看 ...

好的，感谢，打算本周做，我们这边做流式需要预约等手续，操作由负责仪器的老师进行，周末也不开放，出现问题想解决得费很长周期，

niwanmao

gaga1989xl 发表于 2015-4-20 08:55
这个也想过了，查看了一下刺激抗体的克隆号（OKT3）和流式克隆号(BW##)，两者是不同的,这样应该不会存在 ...

嗯。那检查一下抗体本身的质量了。

hbezyr

niwanmao 发表于 2015-4-18 20:48
CD3刺激后再用CD3标记，会不会已经是被CD3结合掉，所以标不上？

还有一种可能是不是CD3刺激后转入胞内了。看到在OMIP上，有人的CD3都放在了破膜后染的。

小憨

hbezyr 发表于 2015-4-20 14:18
还有一种可能是不是CD3刺激后转入胞内了。看到在OMIP上，有人的CD3都放在了破膜后染的。 ...

哦，还有这种情况，学习了。那我觉得可以刺激前染一管，刺激后染一管，就能看出CD3刺激的影响了。