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[淋巴细胞亚群] 中性粒细胞

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发表于 2015-4-21 20:55:02 | 显示全部楼层 |阅读模式
1流星
请问如何可以从外周血分离中性粒细胞?分离后如何检测其纯度?用流式标记中性粒的具体方法?谢谢....

发表于 2015-4-21 21:23:25 | 显示全部楼层
一般对于人类标本,各类细胞的相对特异标记如下:
B Cells        CD19
T Cells        CD3, CD56(-)
Activated T Cells        CD25, CD69
Dendritic Cells          CD1c, CD83, CD141, CD209, MHC II
Plasmacytoid Dendritic Cells*         CD123, CD303, CD304
Platelets (resting)        CD42b
Platelets (activated)        CD62P
Natural Killer Cells        CD3(-), CD16, CD56
Hematopoietic Stem Cell        CD34, CD90
Macrophage          CD11b, CD68, CD163
Monocyte          CD14, CD16‡, CD64
Plasma Cells        CD138
Red Blood Cells        CD235a
Neutrophils        CD15, CD16, CD49d(-)
Basophils        2D7 antigen, CD117(-), CD123, CD203c, FcεRIα
Eosinophils        CD11b, CD193, EMR1, Siglec-8

粒细胞,你可以用CD45直接分群,也可以加上CD15之类的抗原一起分析。
但如果你要分离粒细胞,可以常用磁珠分选,也可以采用流式分选。
 楼主| 发表于 2015-4-22 10:57:40 | 显示全部楼层
我是用CD11B标记的大鼠中性粒,做流式的时候全部没标上去,说明书上说要在4度孵育,请问下4度孵育是不是要用多聚甲醛固定,具体的浓度是多少?
发表于 2015-4-22 19:35:18 | 显示全部楼层
谢小雯要hold住 发表于 2015-4-22 10:57
我是用CD11B标记的大鼠中性粒,做流式的时候全部没标上去,说明书上说要在4度孵育,请问下4度孵育是不是要 ...

不用固定,孵育温度不是很重要,请排除以下问题:
1、抗体质量?
2、抗体是否针对大鼠?
3、电压和圈门是否正确?
 楼主| 发表于 2015-4-22 20:29:54 | 显示全部楼层
Abcom的抗体,应该没问题,针对大鼠,流式检测是专门的老师,应该也不存在问题。。
发表于 2015-4-22 20:53:22 | 显示全部楼层
谢小雯要hold住 发表于 2015-4-22 20:29
Abcom的抗体,应该没问题,针对大鼠,流式检测是专门的老师,应该也不存在问题。。 ...

如果确定2、3都没有问题,那么就可能是1,建议再重复一次,仍是这样,可申请向厂家退货。
发表于 2020-5-11 14:39:35 | 显示全部楼层
niwanmao 发表于 2015-4-21 21:23
一般对于人类标本,各类细胞的相对特异标记如下:
B Cells        CD19
T Cells        CD3, CD56(-)

有小鼠的吗
发表于 2020-5-11 17:50:00 | 显示全部楼层

B Cells        CD19
T Cells        CD3, CD49b (clone DX5) (-)
Activated T Cells        CD25, CD69
Dendritic Cells*         CD11c, MHC II
Plasmacytoid Dendritic Cells*         CD11cint, CD317
Platelets (resting)        CD41  
Platelets (activated)        CD62P
Natural Killer Cells        CD3(-), CD49b (clone DX5)
Hematopoietic Stem Cell        CD48, CD117, CD150, Sca-1
Macrophage*         F4/80, CD68
Monocyte*         CD11bhi, CD115hi, Gr-1lo, Ly-6C‡
Plasma Cells        CD138
Red Blood Cells        TER-119
Neutrophils        CD11b, CD115(-), Ly-6B.2, Ly-6Clo/neg, Ly6G, Gr-1
Basophils        CD200R3, FcεRIα
Eosinophils        CD11b, CD193, F4/80, Siglec-F

来源 :https://www.biolegend.com/en-us/essential-markers
发表于 2020-5-12 10:54:31 | 显示全部楼层
niwanmao 发表于 2020-5-11 17:50
B Cells        CD19
T Cells        CD3, CD49b (clone DX5) (-)
Activated T Cells        CD25, CD69

,谢谢!
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