中性粒细胞

谢小雯要hold住

请问如何可以从外周血分离中性粒细胞？分离后如何检测其纯度？用流式标记中性粒的具体方法？谢谢....

niwanmao

一般对于人类标本，各类细胞的相对特异标记如下：
B Cells        CD19
T Cells        CD3, CD56(-)
Activated T Cells        CD25, CD69
Dendritic Cells          CD1c, CD83, CD141, CD209, MHC II
Plasmacytoid Dendritic Cells*         CD123, CD303, CD304
Platelets (resting)        CD42b
Platelets (activated)        CD62P
Natural Killer Cells        CD3(-), CD16, CD56
Hematopoietic Stem Cell        CD34, CD90
Macrophage          CD11b, CD68, CD163
Monocyte          CD14, CD16‡, CD64
Plasma Cells        CD138
Red Blood Cells        CD235a
Neutrophils        CD15, CD16, CD49d(-)
Basophils        2D7 antigen, CD117(-), CD123, CD203c, FcεRIα
Eosinophils        CD11b, CD193, EMR1, Siglec-8

粒细胞，你可以用CD45直接分群，也可以加上CD15之类的抗原一起分析。
但如果你要分离粒细胞，可以常用磁珠分选，也可以采用流式分选。

谢小雯要hold住

我是用CD11B标记的大鼠中性粒，做流式的时候全部没标上去，说明书上说要在4度孵育，请问下4度孵育是不是要用多聚甲醛固定，具体的浓度是多少？

niwanmao

谢小雯要hold住 发表于 2015-4-22 10:57
我是用CD11B标记的大鼠中性粒，做流式的时候全部没标上去，说明书上说要在4度孵育，请问下4度孵育是不是要 ...

不用固定，孵育温度不是很重要，请排除以下问题：
1、抗体质量？
2、抗体是否针对大鼠？
3、电压和圈门是否正确？

谢小雯要hold住

Abcom的抗体，应该没问题，针对大鼠，流式检测是专门的老师，应该也不存在问题。。

niwanmao

谢小雯要hold住 发表于 2015-4-22 20:29
Abcom的抗体，应该没问题，针对大鼠，流式检测是专门的老师，应该也不存在问题。。 ...

如果确定2、3都没有问题，那么就可能是1，建议再重复一次，仍是这样，可申请向厂家退货。

damaiyawo

niwanmao 发表于 2015-4-21 21:23
一般对于人类标本，各类细胞的相对特异标记如下：
B Cells        CD19
T Cells        CD3, CD56(-)

有小鼠的吗

niwanmao

damaiyawo 发表于 2020-5-11 14:39
有小鼠的吗

B Cells        CD19
T Cells        CD3, CD49b (clone DX5) (-)
Activated T Cells        CD25, CD69
Dendritic Cells*         CD11c, MHC II
Plasmacytoid Dendritic Cells*         CD11cint, CD317
Platelets (resting)        CD41  
Platelets (activated)        CD62P
Natural Killer Cells        CD3(-), CD49b (clone DX5)
Hematopoietic Stem Cell        CD48, CD117, CD150, Sca-1
Macrophage*         F4/80, CD68
Monocyte*         CD11bhi, CD115hi, Gr-1lo, Ly-6C‡
Plasma Cells        CD138
Red Blood Cells        TER-119
Neutrophils        CD11b, CD115(-), Ly-6B.2, Ly-6Clo/neg, Ly6G, Gr-1
Basophils        CD200R3, FcεRIα
Eosinophils        CD11b, CD193, F4/80, Siglec-F

来源 ：https://www.biolegend.com/en-us/essential-markers

damaiyawo

niwanmao 发表于 2020-5-11 17:50
B Cells        CD19
T Cells        CD3, CD49b (clone DX5) (-)
Activated T Cells        CD25, CD69

，谢谢！