5种常见串联染料的降解

niwanmao

实验室中，经常会用到一些串联染料，例如PE-cy7、PE-cy5.5等，由于串联染料容易发生降解，所以需要对每一个批次的抗体进行验证其稳定程度。在排除掉其它因素之后，串联染料的降解，很可能就是许多站友结果不稳定或异常结果的原因。
下面6幅图片，演示了三种PE串联染料（其中PC7用了CD10和CD2两个抗体）和两种APC串联染料的降解前后流式检测结果，这些染料分别是：
1. Phycoerythrin-Texas Red-X，又称PE-Texas Red或ECD（488nm激发，606-635nm发射）；
2. Phycoerythrin-Cyanin 5.5，又称 PE-Cy5.5或PC5.5（488nm激发，680-710nm发射）；
3.  Phycoerythrin-Cyanin 7，又称PE-Cy7或PC7（488nm激发，>755nm发射）。
4. Allophycocyanin-Alexa700，又称APC-A700（633nm激发，715-735nm发射）；
5. Allophycocyanin-H7，又称APC-H7（633nm激发，785nm发射）。


下列图片中，左侧列为该染料在其检测通道的荧光，右侧列为该染料在PE或APC通道的荧光，每个图第一行代表标本染色后马上上机，第二行代表标本暴露于光照下6小时后检测。可见，每种染料均发生了不同程度的荧光降解，导致PE或APC通道的荧光明显增高。


CD38 ECD

CD38 PC5.5



CD2 PC7和CD10 PC7


CD10 APC-A700


CD45 APC-H7

tianhuahuang

谢谢倪老师，很好的数据！

249869829

倪老师，您好！什么叫串联燃料？不是太明白，请指教。谢谢！

zhang4083

个人理解：串联染料是合成的。
例如：Phycoerythrin就是PE，Phycoerythrin-Texas Red-X，后面的Texas Red 就是后来人工加上的。所以叫串联。

小憨

我特别不爱用串联染料，降解就降解吧，降解以后还造成别的通道的假阳性……

niwanmao

小憨 发表于 2015-6-8 08:00
我特别不爱用串联染料，降解就降解吧，降解以后还造成别的通道的假阳性…… ...

还好吧。也不要过于担心吧。

206895386

老师，你好。我这边用PE/CY5串联染料染完色后，PBS洗一次，然后用0.1%的多聚甲醛重悬，4°C保存，第二天上机检测，发现有PE信号干扰，无法收集。

niwanmao

206895386 发表于 2016-6-8 15:23
老师，你好。我这边用PE/CY5串联染料染完色后，PBS洗一次，然后用0.1%的多聚甲醛重悬，4°C保存，第二天上 ...

串联染料固定很危险。

206895386

niwanmao 发表于 2016-6-8 18:41
串联染料固定很危险。

谢谢老师，顺便再问一下。这个串联染料染色时间一般是多长？是4°C染色还是37°C染色还是室温染色？

niwanmao

206895386 发表于 2016-6-30 17:24
谢谢老师，顺便再问一下。这个串联染料染色时间一般是多长？是4°C染色还是37°C染色还是室温染色？ ...

染色时间一样啊，4度或室温均可，关键还是避光。