溶血顺序不同造成结果差异

yuemin5

倪老师，各位同道。
我们在做一个膜抗原检测：
1、先做外周血白细胞中该抗原的检测，全血染色，溶血，洗涤，上机，得到该抗原表达比例A;
2、同一样本，PBMC分离，染色，洗涤，上级，得到该抗原表达比例B；
3、还是这个样，全血，先溶血，再染色，洗涤，上机，得到抗原表达比例C。
结果：
    A最低，大概5%以下，B大概10%左右，C大概50%。

看来细胞的处理会影响抗原的表达，暂时没想通原因，向大家请教。

谢谢！

niwanmao

单标吗？同型或阴性对照做了吗？这三种不同处理方式不能用同一个门的。

wzr19990923

PBMC这个好理解，肯定比例高些，因为只有单个核细胞了，分母小了。
但是先标记后溶血和先溶血后标记为什么不同呢？不是一样的裂解了成熟红细胞吗？

yuemin5

niwanmao 发表于 2015-4-30 13:29
单标吗？同型或阴性对照做了吗？这三种不同处理方式不能用同一个门的。

一般三个标记吧。同型有做。都用的CD3圈门。

yuemin5

wzr19990923 发表于 2015-5-1 11:29
PBMC这个好理解，肯定比例高些，因为只有单个核细胞了，分母小了。
但是先标记后溶血和先溶血后标记为什么 ...

我们都是用总T（CD3+）圈门，算的是该抗原在T细胞中表达比例。

niwanmao

yuemin5 发表于 2015-5-4 11:42
一般三个标记吧。同型有做。都用的CD3圈门。

能传一下图或者原始数据吗？如果分群良好不应该会相差这么大。

ddn111

商品化的RBC裂解液有的有固定成分！所以先裂后标记和先标后裂会有差别！

mengdecao

ddn111 发表于 2015-5-6 15:18
商品化的RBC裂解液有的有固定成分！所以先裂后标记和先标后裂会有差别！

同意ddn111的意见。 通常是先染色，再裂解。

yuemin5

mengdecao 发表于 2015-5-7 00:15
同意ddn111的意见。 通常是先染色，再裂解。

同意，而且不同商品化溶血素的成分不一样，对结果造成的影响也不一样。后面我们对比过不同的溶血素产品，在非正常操作（先溶血，后染色）下，贝克曼的溶血素对结果影响相对BD的要小。

不过这个问题确实没必要纠结，只是提醒大家一定要按照正确的顺序进行操作。
https://flowcyto.cn/bbs/forum.php?mod=attachment&aid=Nzk5NnwwZWIzNzQ3MXwxNzM1MDg3OTEyfDB8

yuemin5

niwanmao 发表于 2015-5-4 14:35
能传一下图或者原始数据吗？如果分群良好不应该会相差这么大。

谢谢倪老师！ P.S 笔记本已收到。很漂亮。