流式检测ros 光补偿 细胞发绿色荧光

杨敏

第一次做流式，我买了life的CellROX® Flow Cytometry Assay Kits检测ros的试剂，因为我的细胞本身发绿色荧光，我不清楚什么情况下需要光补偿。这是里面试剂参数CellROX® Deep Red Ex/Em maxima(in nm)640/665 ；CellROX® Orange Ex/Em maxima(in nm) 545/565。这个需要荧光补偿吗？谢谢

ddn111

杨敏 发表于 2015-5-4 21:09
谢谢老师，我用的是这个CellROX® Green and CellROX® Orange Flow Cytometry Assay Kits试剂盒，链接是 ...

楼主选用的是盒子有红色（640/658）+橙色(545/565)，再加上细胞带有绿色(488/520?)，相当于FITC、PE、APC三色的！要做补偿对照，这三个通道其实有个带绿色荧光的细胞调补偿就差不多了！
其它就是实验的阴阳性对照了！

杨敏

看发射波长

niwanmao

从Life网站的产品参数看，CellROX® Deep Red和CellROX® Orange应该是两个kit吧。
对于发绿色荧光的细胞，建议还是用前者更好，至于补偿，从激发和发射波长看，deep red kit是不用调节补偿的。

杨敏

niwanmao 发表于 2015-5-4 20:03
从Life网站的产品参数看，CellROX® Deep Red和CellROX® Orange应该是两个kit吧。
对于发绿色荧光的细胞， ...

谢谢老师，我用的是这个CellROX® Green and CellROX® Orange Flow Cytometry Assay Kits试剂盒，链接是http://www.lifetechnologies.com/ ... ICID=search-product。里面加完CellROX® Detection Reagent 45min后加入SYTOX® Dead Cell Stain solution，然后进行流式上机检测。请问老师我该怎么设置实验对照？

niwanmao

杨敏 发表于 2015-5-4 21:09
谢谢老师，我用的是这个CellROX® Green and CellROX® Orange Flow Cytometry Assay Kits试剂盒，链接是 ...

用未处理的细胞作为阴性对照，再设置一个肯定可以引起ROS变化的药物诱导作为阳性对照。