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[结构和原理] eBioscience的 treg 试剂盒使用时如何调补偿

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发表于 2015-5-6 12:01:00 | 显示全部楼层 |阅读模式
悬赏1流星未解决
如题,想测小鼠外周血和脾脏的treg,买的是eBioscience的试剂盒。
里面有这么几支抗体:
Anti-Mouse CD4 FITC (RM4-5): 50 µg. Use at 0.125 µg/tes
Anti-Mouse CD25 APC (PC61.5): 50 µg. Use at 0.06 µg/tes
Anti-Mouse/Rat Foxp3 PE (FJK-16s): 25 µg. Use at 0.5 µg/test
Rat IgG2a Isotype Control PE: 50 µg. Use at 0.5 µg/test
Anti-Mouse CD16/32 (Fc Block) Purified: 50 µg. Use at 1-5 µg/test


从来没测过treg。请问如何调补偿?需要CD4、CD25和Foxp3单染的管子吗?需要同型对照吗?
谢谢各位老师和同学~

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发表于 2015-5-6 12:46:29 | 显示全部楼层
这种荧光组合在配备488nm(FITC),561nm(PE),640nm(APC)三杆激光的流式仪上基本不需要调补偿,注意下FITC减掉一点点PE信号就可以了。
调补偿要准备每种荧光抗体的单阳性对照(单染,且同时有阳性群和阴性群)来进行。

CD25一般表达不高,还有可能存在非常弱阳性表达的T细胞群.需要同型对照。
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发表于 2015-5-6 13:18:58 | 显示全部楼层
可以只做CD4单标,调节PE-FITC补偿。
至于FITC-PE的补偿值一般很小,并且foxP3荧光不会很强,不调节补偿没关系。
CD25和其它两个标记之间不存在补偿。

同型对照需要,但是结合FMO对照,就是说设置CD4、CD25、Rat IgG2a Isotype Control这么一管作为foxP3设门对照。

具体分析方法参见:http://www.flowcyto.cn/bbs/thread-2114-1-1.html
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 楼主| 发表于 2015-5-10 21:43:24 | 显示全部楼层
niwanmao 发表于 2015-5-6 13:18
可以只做CD4单标,调节PE-FITC补偿。
至于FITC-PE的补偿值一般很小,并且foxP3荧光不会很强,不调节补偿没 ...

谢谢倪老师
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发表于 2016-1-25 20:43:53 | 显示全部楼层
niwanmao 发表于 2015-5-6 13:18
可以只做CD4单标,调节PE-FITC补偿。
至于FITC-PE的补偿值一般很小,并且foxP3荧光不会很强,不调节补偿没 ...

请问老师针对Treg,调电压的细胞、还有单标组,是否都需要做到破核膜而不标FOXP3那一步?这样是不是做出来图就不用再进一步调了。谢谢老师
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发表于 2016-1-25 20:49:16 | 显示全部楼层
暖希贤 发表于 2016-1-25 20:43
请问老师针对Treg,调电压的细胞、还有单标组,是否都需要做到破核膜而不标FOXP3那一步?这样是不是做出 ...

Treg其实还是简单的,分群都还是比较清楚的,真要做对照,确实要做到除了标记的抗体不同,破核膜等处理因素要一致。
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