求助流式图分析

令狐武玲

各位老师：       您们好。我从外周血提取单核细胞，贴壁分离淋巴细胞后加细胞因子诱导5天，PE-anti-CD83，结果如图所示，请问为什么会出现这么多群细胞，是杂质细胞太多提纯有误？各细胞群都是什么细胞？
       谢谢！

niwanmao

你其它标记都没有做？
能把SSC改为线性看看吗？感觉蓝色这群不是正常细胞，P1和P3似乎都算单核。

令狐武玲

niwanmao 发表于 2015-5-14 08:39
你其它标记都没有做？
能把SSC改为线性看看吗？感觉蓝色这群不是正常细胞，P1和P3似乎都算单核。 ...

因为细胞数量少，不够双染，所以就只做了一个marker检测。
SSC线性图我找别人弄弄再上传，flowjo我自己不会用啊。
蓝色那群细胞可能是死细胞吗，倪老师？

niwanmao

令狐武玲 发表于 2015-5-14 14:25
因为细胞数量少，不够双染，所以就只做了一个marker检测。
SSC线性图我找别人弄弄再上传，flowjo我自己不 ...

不一定，也可能是淋巴细胞。

令狐武玲

niwanmao 发表于 2015-5-14 14:38
不一定，也可能是淋巴细胞。

倪老师你分析看看~
https://flowcyto.cn/bbs/forum.php?mod=attachment&aid=ODAzOHw3ZDMwOWZlMXwxNzM1MDAxNTA0fDB8

niwanmao

令狐武玲 发表于 2015-5-14 19:26
倪老师你分析看看~

分群应该如下：

令狐武玲

niwanmao 发表于 2015-5-14 20:11
分群应该如下：

这样子的话我的单核细胞都不见了啊，还有诱导的树突状细胞就失败了啊哭

niwanmao

令狐武玲 发表于 2015-6-3 10:20
这样子的话我的单核细胞都不见了啊，还有诱导的树突状细胞就失败了啊哭 ...

也不一定，也有可能混在粒细胞和死细胞之间的区域（没圈），你可以用DC特异性标记反圈门看看。

令狐武玲

niwanmao 发表于 2015-6-3 11:14
也不一定，也有可能混在粒细胞和死细胞之间的区域（没圈），你可以用DC特异性标记反圈门看看。 ...

倪老师，反圈门是什么意思？怎么做到的？我是初学者，别见怪~

niwanmao

令狐武玲 发表于 2015-6-3 11:18
倪老师，反圈门是什么意思？怎么做到的？我是初学者，别见怪~

反设门就是指圈中阳性分群比较好的、标记表达特异性好的那群细胞（例如你圈CD80阳性的DC细胞），然后在FSC/SSC散点图上看它在哪个位置，说明那群细胞可能就是。