多发性骨髓瘤并非你想象的那么简单

niwanmao

随着新药的问世，目前多发性骨髓瘤（MM）的缓解率已经大大提高，但仍有很大一部分患者最后还是要复发，整体生存期主要依赖于残留/耐药骨髓瘤浆细胞对治疗的敏感性。由此可见，治疗的不同时间应该存在不同的少量骨髓瘤细胞对化疗耐药，从而导致肿瘤复发，也就是说MM患者体内可能存在不同亚群的骨髓瘤浆细胞，它们可能免疫表型、遗传学特征不同，但都对化疗耐药。
多色流式细胞术可通过异常抗原表达来鉴别克隆性浆细胞，所以在检测骨髓瘤浆细胞多个克隆上有着天然的优势。T Paíno等人利用多色流式细胞术检测了116例初发MM患者的表型异质性，并且通过MRD跟踪，对不同克隆的骨髓瘤浆细胞进行耐药性评估。

流式检测方案：
荧光标记依次为Pacific Blue (PacB), Pacific Orange (PacO), fluorescein isothiocyanate (FITC), phycoerythrin (PE), peridinin chlorophyllprotein-cyanin 5.5 (PerCP-Cy5.5), PE-cyanin 7 (PE-Cy7), allophycocyanin
(APC), alexafluor700 (AF700)
(i) CD29, CD45, CD11a, β7, CD79b, CD49d, CD19, CD38;
(ii) CD11c, CD45, CD41a, CD49e, CD33, CD117, CD19, CD38;
(iii) CD20, CD45, CD81, CD54, CD138, CD56, CD19, CD38;
(iv) HLA-DR, CD45, CD44, CXCR4, CD27, CD28, CD19, CD38.

文中的数据分析方法挺先进，利用欧洲的Infinicyt软件功能，根据四管中5个共同参数（CD38、CD45、CD19、FSC、SSC），将四管数据合并成单个数据，最后软件根据主成分分析的PC1和PC2变量对浆细胞进行自动分群，具体算法咱们不去追究，看结果。



图1. MM的肿瘤内表型异质性。 初发MM患者的数据Infinicyt合并后再进行主成分分析和自动分群，发现存在多群亚克隆（a），在经典的二维散点图（b）和直方图（c）上也能看到。d图的三个三维图是a图其它几个角度的视图。




图2. 检测MM患者的MRD时，可发现不同表型骨髓瘤浆细胞的耐药性。上面10幅图均表示9个疗程后，各个MM患者体内骨髓瘤浆细胞克隆的变化情况，每个图上面的数字是患者编号，图中双曲线表示初发时的细胞分布情况。可见MRD中，初发时的多个克隆会剩下一些耐药的克隆。




图4. 对不同亚群分选后，FISH检测发现不同亚群的染色体异常谱相差非常大。

综上可见，利用多色流式细胞术进行MM的精细免疫分型，对于临床治疗的指导非常有价值。

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流式中文网编译自T Paíno《Phenotypic identifi cation of subclones in multiple myeloma with different chemoresistant, cytogenetic and clonogenic potential》

wfz

荧光标记依次为Pacific Blue (PacB), Pacific Orange (PacO), fluorescein isothiocyanate (FITC), phycoerythrin (PE), peridinin chlorophyllprotein-cyanin 5.5 (PerCP-Cy5.5), PE-cyanin 7 (PE-Cy7), allophycocyanin
(APC), alexafluor700 (AF700),进展 很快，要好好学。