用Accuri C6检测转染细胞凋亡应该选择哪些荧光素？

470913706

各位好，请问Accuri C6标准配置的机器（488nm蓝色激光和640nm红色激光）检测EGFP转染细胞的细胞凋亡，应该选用哪几个荧光素标记的凋亡检测试剂盒？
Annexin V-PE/7-AAD双染和Annexin V-APC/7-AAD双染可以吗？
7-AAD的激发波长是488nm还是546nm，还是都可以？
谢谢！

小憨

建议选择PI和APC标记的Annexin V，二者不用补偿，只要调一下EGFP漏到FL2通道的补偿就行了，我个经验值是6%

sunzheng_99

在c6上选   FL2--PE    FL3--7AAD

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sunzheng_99 发表于 2015-5-22 09:31
在c6上选   FL2--PE    FL3--7AAD

谢谢，7-AAD能被488nm激光激发吗？

sunzheng_99

可以  但不是最大（好）激发     

470913706

sunzheng_99 发表于 2015-5-22 10:51
可以  但不是最大（好）激发

应该先后分别用哪几个参数轴组合分群呢？FSC-A/SSC-A排除碎片，组合设门：FSC-A/EGFP-A分群EGFP阳性和阴性群吗？还是单一设门：EGFP-A的直方图直接分出阴性和阳性群？

小憨

补充：如果要圈门GFP阳性细胞，还得调一下PI向FL1漏的补偿。

470913706

小憨 发表于 2015-5-22 21:14
建议选择PI和APC标记的Annexin V，二者不用补偿，只要调一下EGFP漏到FL2通道的补偿就行了，我个经验值是6% ...

FL1(EGFP)和FL3(7-AAD)，FL1(EGFP)和FL4(APC)也不需要调补偿，只需要调APC和7-AAD的补偿吧,这三种要方便点吧？

niwanmao

470913706 发表于 2015-5-22 17:15
应该先后分别用哪几个参数轴组合分群呢？FSC-A/SSC-A排除碎片，组合设门：FSC-A/EGFP-A分群EGFP阳性和阴性 ...

设门按照前者更好，选FSC/SSC排除碎片，然后圈EGFP阳性，最后分析AV/PI。

niwanmao

470913706 发表于 2015-5-22 22:45
FL1(EGFP)和FL3(7-AAD)，FL1(EGFP)和FL4(APC)也不需要调补偿，只需要调APC和7-AAD的补偿吧,这三种要方便 ...

是的。